RNA干预的机制与应用.pdfVIP

维普资讯 第 l1卷 第 1期 华 南 热 带 农 业 大 学 学 报 2005年 3月 Vo1．11 No．1 JOURNAL0FS0UTHCHINAUNIVERSITY0FTR0PICALAGRICU删 RE Mar．2oo5 RNA干预的机制与应用 查笑君 (浙江师范大学化学与生命科学学院 浙江金华 321004) 摘要 综述RNAi的作用机制 ，RNAi对生物的作用 ，RNAi技术的应用，展望 RNAi技术的前景。 关键词 RNA干预 双链RNA 基因沉默 中图分类号 Q943 RNA干预 (RNAinterference，简称 RNAi)，是 小片段 ，即小干涉 RNA (shortinterferingRNA， 指通过反义 RNA与正义 RNA形成双链 RNA，特 siRNA)闱。SiRNA的长短具有种族特异性 ，siRNA 异地抑制靶基因的转录后表达的现象。 的双链都有 5 端磷酸基和 3 端羟基 ，在 3 端有 早在 1990年 ，Napoli等 【】在将一个能产生色 2～3个突出的核苷酸嘲。这些结构都非常重要 ，缺 素的基因置于一个强启动子之后导入矮牵牛的研 乏任何一个结构的 siRNA都不能诱发 RNAi机 究中发现了共抑制现象(Cosuppression)。因其发生 制。(2)持续阶段 ：siRNA作为引物按照碱基互补原 在基因转录后水平 ，所 以又被称为转录后基因沉 则与靶基因转录出的mRNA结合，在RNA指导下 默(Posttranscriptionalgenesilence，PTGS)。1995年 的RNA聚合酶 (RNAdirectedRNApolymorase， 康乃尔大学的Guo博士121在实验中通过反义 RNA RdRP)作用下再次形成dsRNA，dsRNA又被切割 阻断秀丽新小杆线虫(C．elegans)的基因表达时意 成 siRNA，新形成的siRNA又可以进入下轮循环 外的发现正义 RNA同样能抑制该基因的表达 ， 反应产生级联放大效应。(3)效应阶段：siRNA结合 Guo等人一直不能解释该现象。直到 1998年2月 内切核酸酶和其他蛋 白质一起形成 RNA诱导沉 Fire等I才发现这是因为 Guo博士在实验 中污染 默 复 合 物 (RNA—induced silencingcomplex， 了双链 RNA而引起的。他们还证明转录得到的单 RISC)，RISC的核酸部分起靶向性 的作用 ，蛋 白质 链 RNA经纯化后注射线虫所引起的阻断作用十 部分起降解 mRNA的作用。使得靶基因的mRNA 分微弱，而经纯化的双链 RNA则能高效特异地阻 转录后沉默。因此 ，如果把免疫系统看成机体维持 断相应基 因的表达 ，并将这种现象称为 RNA干 蛋 白稳定的一个反应系统，那么RNAi反应机制 预。RNAi现象广泛存在于果蝇 、斑马鱼、真菌及植 就可以看成是机体维持核酸稳定的免疫系统。 物等大多数真核生物中。由于RNAi存在的重要 意义和近几年的研究进展 ，科《学》杂志在 2001年 2 RNAi对生物的作用 将其列为当年十大科学成就之一，2002年又将其 2．1 保护基因组免受外源核酸侵入 列为当年十大科学成就之首。 许多生物体 中导入 dsRNA，可引起体内同源 基因特异性沉默，当病毒RNA侵入细胞后 ，RNA 1 RNAi的作用机制 就是机体监视系统的成员，检测病毒信息，降解病 大量的实验表明RNAi大致可以分为三个阶 毒核酸和蛋白，维持宿主基因组