海洋放线菌ACMA006抗肿瘤活性成分的分离纯化及结构鉴定.pdfVIP

第 30卷 第 3期 台 湾 海 峡 Vo1．30．No．3 2011年8月 JOURNAL OF OCEANOGRAPHY IN TAIWAN STRAIT Aug．，2011 海洋放线茵 ACMAOO6抗肿瘤活性成分的 分离纯化及结构鉴定 曹 雪 ，杨瑞丽 ，袁献温 ，奚 涛 ，杨臻峥 (I．东南大学医学院病原生物学和免疫学系，江苏南京 210009； 2．中国药科大学生命科学与技术学院，江苏 南京 210009) 摘要：对从 中国江苏连云港海域中筛选出的海洋放线菌ACMA006的发酵产物进行 了分离纯化，获 得2种抗肿瘤活性化合物，并进一步鉴定其结构．海洋放线菌ACMA006经大规模发酵后，发酵液 采用溶剂萃取法提取其 中的抗肿瘤活性成分，并利用硅胶柱层析、制备薄层及 HPLC等方法对萃取 物进行分离得到单体化合物．利用红外光谱 、质谱 、核磁共振 H‘—HMR谱和 C．NMR谱等波谱数据 对单体化合物的结构进行解析和鉴定．结果表明化合物B为放线菌素D，其分子式为c H N O 含有2个多肽酯环，由L一苏氨酸、D一缬氨酸、L脯氨酸、N一甲基甘氨酸和L．N一甲基缬氨酸组成，通过 羧基与发色母核吩嗯嗪酮相连接．化合物A可能为放线菌素D的衍生物．这是国内外首次从海洋 放线菌中分离提取出放线菌素D． 关键词：海洋生物学；放线茵；抗肿瘤活性；放线菌素D；分离纯化；结构鉴定 DOI：10．3969／J．ISSN2011．03．016 中图分类号：Q178．53 文献标识码 ：A 文章编号：1000—8160(2011)03-0400-05 癌症是全世界一个主要的致死病种．临床上肿 生物．这是国内外首次从海洋放线菌中分离提取出 瘤多采用综合疗法，以手术切除、放疗 、化疗和免疫 放线菌素D． 治疗相结合．随着科学技术的发展 ，药物治疗取得了 1 材料与方法 很大的进步 。。，但现有药物还远远不能满足人类战 胜这一顽疾 的需要．随着人们对生活质量的 日益重 1．1 材料 视，对开发高效、低毒的抗肿瘤药物的要求变得 日益 I．1．1 菌株 供试菌株为海洋放线菌 ACMA006． 迫切． 该菌株从连云港海域采集的海泥样品中分离出，现 微生物是一种重要的天然产物资源，而 占地球 已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会 ，专利菌 面积70％的海洋中的微生物，为新药的开发带来新 种保藏编号为 CGMCCNo．2027． 的资源．自20世纪60年代起，从海洋寻找天然活性 1．1．2 细胞株 人肝癌 HepG2细胞由本实验室冻 物质开始成为一大热点．海洋微生物因采样容易、研 存和常规传代培养． 究周期短、筛得率高且无资源再生之虞等优点而倍 1．1．3 主要仪器 恒温振荡器 (SHZ一82型，常州 受青睐．同时，生物活性物质的产生具有一定的生态 国华电器有限公司生产)；高效液相色谱仪 (分析 及物种分布规律，从海洋微生物中寻找和开发有效 型，PU-2086PLUS，日本 JASCO公司生产)；高效液 的抗肿瘤新药具有广阔的前景 ． 相色谱仪 (半制备型，PU-2086PLUS，日本JASCO公 本实验对从连云港海域筛选出的具有抗肿瘤活 司生产)；红外光谱仪 (FI／IR-4100，日本 JASCO公 性的放线菌 ACMA006进行大量发酵和纯化，获得 司生产)；紫外一可见分光光度计 (UV-2450，日本 了2种抗肿瘤活性化合