中国水仙水通道蛋白基因cDNA克隆、序列分析与表达.pdfVIP

福建农业 学报 26(3)：371～376，2011 FujtanJournalofAgriculturalSciences 文章编号 ：1008 0384 (2011)03—371—06 中国水仙水通道蛋白基 因 eDNA克隆、序列分析与表达 林江波 ，王伟英 ，邹 晖 ，戴艺民 (福建省农业科学 院甘蔗研究所 ，福建 漳州 363005) 摘 要 ：以构建的中国水仙不同花期的抑制差减杂交文库 (SSH)为基础 ，采用 RACE及 RTPCR技术 ，分离 克隆到 1个水通道蛋 白基因NtPIP1。此基 因包含有一个 867bp完整阅读框架 (ORF)，编码 288个氨基酸 ，分 子量为 3O．68kD，理论等 电点为 8．97。用生物软件对 NtPIP1蛋 白分析表 明：NtPIP1含有 6个跨膜区，由5个 环相连 ，其中环 A、C和 E在细胞膜外 ，环 B、D和蛋 白的N、c末端都位于细胞膜 内，N末端 55个氨基酸 ，C 末端 9个氨基酸 ，具有 MIP家族典型的保守氨基酸序列 HINPAVTFG和 2个 NPA保守肽段 。三级结构预测表 明和菠菜 (2b5fA)水通道蛋 白结构相似 。聚类分析表 明：该蛋 白与其他 l2个物种 的PIP1类水通道蛋 白同源性 在 91 以上，属于质膜水通道蛋 白PIP1类 。半定量 RT—PCR分析结果表 明：NtPIP1基因在盛花期中国水仙雌 蕊 中的表达量最高 。 关键词 ：中国水仙 ；水通道蛋 白；基因克隆；蛋 白质结构 中图分类号 ：S682．21 文献标识码 ：A Cloning，SequenceAnalysisandExpression ofcDNA EncodingAquaporinNtPIP1of Narcissustazetta vat．chinensis LIN Jiangbo，WANG Wei—ying，ZOU Hut，DAIYi—min (SugarcaneResearchInstitute，FujianAcademyofAgriculturalSciences，Zhangzhou，Fujian 363005，China) Abstract：Based on constructed different florescence suppression subtractive hybridization (SSH ) of Narcissus tazettavar．chinensis，anencodingtransmembraneaquaporin (AQP)geneNtPIP1wasseparatedandcloningby RACE andRT PCR． The NtPIP1 cDNA was867bp，encoding a protein of288 amino acidswith a predicted molecularmassof30．68kD andtheoreticalisoelectricpointof8．97．TheNtPIP1exhibitedatypicalstructurewith sixtransmembranedomainswhich 1inkedbyfiveloops。loopA，CandE wereatoutsideofmembrane，1oopB，D， N terminalandC terminalwereatinsideofmembrane．N termina1has55aminoacidsandC terminalhas9amino acids．TheNtPIP1hastheconsensussequenceHINPAVTFG ofM IPfamilyandtwohighlyconservedpeptidesAsr卜 ProAla(NPA)．Theprotein3D structurewaspredictedbyhomologycomparativemodelinginSwissModel，the resultfrom Swiss—Modelshow