牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因果实特异表达载体的构建及意义.pdfVIP

山东医药2011年第51鲞 三 牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因果实 特异表达载体的构建及意义 戴海燕h。王 华 。文少敏 。解 娜 (1海南医学院口腔医学院，海口570102；2海南医学院海南省热带病重点实验室) 摘要：目的 构建含牙龈卟啉单胞茵菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体，并提高抗原基因的表达量 和免疫原性，为其在番茄果实内表达和研制有效的转基因植物牙周炎疫苗奠定基础。方法 通过PCR获得番茄果 实特异表达启动子E8的核心序列片段(约1．11lb【)，同时合成通过柔性接头连接的霍乱毒素B亚基(CholeraTOx。 inBSubnnit，CTB)和牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA (266-337)(约600bp)序列的基因片段，利用重叠区扩增基因拼接 法将两基因片段连接，得到重组片段E8．CTB．FimA(266-337)，双酶切 E8·CrIB—FimA(266-337)片段和植物表达载 体 pBI121，酶切产物连接后，获得重组载体 pBIE8．CTB-FimA(266-337)，利用酶切方法和测序方法对 pBIE8-CTB- FimA(266-337)进行鉴定。结果 基因测序及酶切结果表明特异表达载体已成功构建。结论 本研究成功构建了 含牙龈卟啉单胞菌菌毛融合抗原基因的番茄果实特异表达载体；该载体可用于转基因植物牙周炎疫苗的研制。 关键词：牙龈卟啉单胞菌；番茄果实特异启动子E8；茵毛蛋白；霍乱毒素B亚基 中图分类号：R781．4 文献标志码：A 文章编号：1002-266X(2011)31-0022-03 Constructionandsignificanceofavectorforfruit-specificexpressionofporphyromonas gingivalisfimbriaefusionantigengene DAlH办 yahl。 NGHua。WEN Shao．min。xlENB (1SchoolofStomatology，HainanMedicalCollege，Haikou570102，P．R．China) Abstract：OHectlve Toconstructavectorfortomatofruit-specificexpressionofporphyromonasgingivalisfimbriac fusionantigengenena dtoenhancetheexpressionlevelsofhtenatigengene88well晒 itsimmunogenicity．聃 htefirststep towardachievingitsexpressionintomatofruitnadthedevelopmentofna effcetivetransgnnicplantvaccineforperiodontitis． Methods PCRWasperformedtocollecthtefragment(about1．11kb)ofhtetomatofruit—specificpromoterE8．Mena- while，arecombinantfragmentcontainingthechdemtoxinBshnunit(CTB)nadFimA (266-337)(about60Obp)genes Was linkedtogether’vitllhteuseof asoftconnectorusinggenesplicingbyovedapextension．msdtinginarecombinnatE8一 CTB-FimA (266-337)fragment，whichthentogehterwitllhteplnatexpressionvectorpBI121underwentdoublerestriction enzymedigestion．TherecombinantvcetorpBIE8-CTBF·imA (266-337)Wasobtaindeafterjmninghterestrictionenzyme— digestde fragmemsnadWascharacterizedbyrestrictionenzymedigestionnadsequencingmehto