农杆菌介导的转谷氨酰胺合成酶基因小麦的抗除草剂特性研究.pdfVIP

维普资讯 植物生态学报 2005，29(2)338～344 ActaPhytoecologicaSinica 农杆菌介导的转谷氨酰胺合成酶基因小麦 的抗除草剂特性研究 黄其满 刘伟华2 孙 辉 邓 新2 苏 金 (1中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081) (2中国农业科学院作物品种资源研究所，北京 100081) 摘 要 谷氨酰胺合成酶(Glutaminesynthetase，GS，E．C．6．3．1．2)是植物氨同化过程中的关键酶，对植物的氮素吸 收和代谢起着至关重要的作用。谷氨酰胺合成酶还是除草剂草胺膦(Phosphinothricin(Pfrr)或 Baste,)的靶标酶。前 期工作已从我国特有的豌豆(Pisums~ium)品种中克隆了细胞质型谷氨酰胺合成酶(GS1)eDNA和叶绿体型谷氨酰 胺合成酶(GS2)cDNA。为了验证谷氨酰胺合成酶的功能，构建了同时含有 GS1eDNA和 GS2eDNA的植物表达载体 D2Gs。以该表达载体通过农杆菌介导法 ，转化小麦(Trt／t2~naestivura)的未成熟胚愈伤组织 ，经 Pfrr筛选及分化再生 培养，获得了抗 Pfrr的转基因小麦植株4l株。PCR和基因组Southem杂交分析证实了GS1和GS2基因已经整合到 转基因小麦的基因组。用除草剂草胺膦Basra溶液涂抹转p2Gs小麦叶片，结果证明Gs转基因植株可以抗高达0． 3％的 Basra溶液 ，而对照植株叶片逐渐变黄直至枯死。转基因小麦植株能正常结实。上述实验结果表明：1)Gs基 因在小麦植株中获得了有效表达，从而赋予小麦植株抗Pfrr特性；2)Gs基因能够作为研究小麦遗传转化的筛选标 记基因。 关键词 谷氨酰胺合成酶 农杆菌介导的遗传转化 转基因小麦 除草剂抗性 AG D C 聊 C雅 ^ ．ⅣI】5 TED TRANSGENIC ，】EⅢAT PLANTS、V删 GLI几AⅣⅡNE SYNTHETASESCoNFER TOLER CE TOH BICII)E HUANGQi—Man LIUWei—Hu SUNHui DENGXin2nadSUJin (1BiotechnologyR Institute．ChineseAcademyofAgricuhuralSciences，Beijing100081，China) (2InstituteofCropGermplasmResources，ChineseAcademyofAgricuhurdSciences，Beijing100081，China) Abstract Cloningofcytosolic(Gs1)eDNAnadchlomplastglutaminesynthetase(Gs2)eDNAfromPisum satium wascarriedoutpreviouslyinourlaboratory．ToidentifythefunctionsoftheGSgenes．wefirstcon． structde aplnatexpressionvcetor，p2GS，harboringtwodifferentisoenzymes，GS1nadGS2cDNAs，underthe controlofwtoconstitutivepromotersofrice，Actinl(Act1)nadmaizeUbiquitin(Ubi)genes．Then，usingna Agrobacteriumtumefaciens．mdeiatde transformationmethod．weintroducde GS1nadGS2genesintowheat (~iticumaestivum)plnats，pr