利用RNAi逆转录病毒载体系统对人朊病毒蛋白表达的稳定抑.pdfVIP

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2017-09-12 发布于重庆
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利用RNAi逆转录病毒载体系统对人朊病毒蛋白表达的稳定抑.pdf

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生物工程学报 Chin J Biotech 2009, July 25; 25(7): 1022- journals .im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 医学与免疫生物技术利用RNAi 逆转录病毒载体系统对人朊病毒蛋白表达的稳定抑制 1,2 3 1,2 1 徐文婧 , 王娣 , 王娟 , 杨怀义 1 中国科学院微生物研究所, 北京 100101 2 中国科学院研究生院, 北京 100039 3 北京中医药大学, 北京 100029 C 摘要: 朊病毒是引起可传染的致死性海绵状脑病的致病因子, 细胞中正常的朊病毒蛋白(PrP )在该疾病病程发展中起 C C C 着必不可少的作用。同时, PrP 已被证明在胃癌、乳腺癌等癌症中发挥着保护癌细胞的作用。根据人源PrP (HuPrP ) C cDNA序列, 本研究设计了4 种 19 nt 的siRNA, 将其构建成RNAi逆转录病毒载体系统, 进行了其对HuPrP 表达的抑制效 C 应的分析, 从中获得了能高效稳定抑制HuPrP 表达的 3 种靶向序列, 其中si626(5-GGTTGAGCAGATGTGTATC-3) 的抑制效果最为明显, 其抑制效率可达 85%以上。随后, 利用筛选出的si292 和si626 的稳定干扰细胞系进行了细胞浸润性实验, 结果发现, PrPC C 干扰细胞系细胞浸润能力显著下降。这为进一步研究朊病毒疾病的基因治疗、以PrP 为靶标进 C 行PrP 相关癌症的辅助治疗研究奠定了一定的基础。关键词: 朊病毒, RNAi, 逆转录病毒载体, 细胞浸润 Stable inhibition of human prion protein through a retrovirus-based RNAi system 1,2 3 1,2 1 Wenjing Xu , Di Wang , Juan Wang , and Huaiyi Yang 1 Institute of Microbiology , Chinese Academy of Sciences, Beijing 1001