蜡梅花药离体培养研究初报.pdf

试验研究2010．12 摩业 ji 蜡梅花药离体培养研究初报 秦红玫 (西华师范大学生命科学学院 四川南充 637002) 摘要 ：本研究主要探索 了蜡梅花药离体培养 中灭菌方式及愈伤组织诱导影响因素。结果表 明：外植 体灭菌采用4％次氯酸钠直接处理花药 20mim 的方式最为方便有效；非胚性愈伤组织诱导培养基 为：MS+2,4一D2．0mg／L+6一BA0．5mg／L+蔗糖 20g／L；胚性愈伤组织诱导培养基为：MS+2,4一D 2．0mg／L+6一BA1．0mg／L+蔗糖 40g／L。 关键词：蜡梅 ；花药；离体培养 蜡梅为蜡梅科蜡梅属植物 ，是我 国重要的传统 冲洗 3～5次一剥出花药一接种。接种的培养基为 MS 名花之一。蜡梅作为传统的、真正意义上的冬季香花 基本培养基 ，附加 2，4一D2．0m#L，琼脂 7．5g／L，蔗糖 植物 ，不仅广泛应用于园林绿化 ，而且用于切花生产 30g／L，调节 pH5．8(下 同)。在 150ml三角瓶中接种 及芳香油提取。蜡梅的常规繁殖技术主要是嫁接 、分 8～10枚花药 ，重复 2次 ，2周后观察统计污染和生长 株 ，而种子繁殖时易发生性状变异 ，且周期长而很少 情况。 采用。此外 。也有少数采用扦插和压条进行繁殖 的， 1．2-3 愈伤组织诱导 采用 MS基本培养基 ，附加激 繁殖系数较低。近年来 ，已经有关于蜡梅组织培养 的 素 2，4一D (0．5 mg／L、1．0 mg／L、2．0 mg／L)、6-BA 研究报道 。张林 (1990)以带芽茎段为外植体获得 了 (O．2mg／L、0．5m L、1．0m#L)、蔗糖 (20geL、40g／L、 再生植株 ，周俊 国(2001，2004)完善了这一体系 。此 60 L)，并采用 4因素三水平正交试验设计进行组 外 ，曾静 (2007)以无菌苗子叶为外植体 ，通过愈伤组 合。4周后 ．对愈伤组织的形成及生长情况进行观察 织途径建立了蜡梅 的再生体系 。关于蜡梅花药培养 统计 。 的研究还未见报道。 1．2．4 花药愈伤组织增殖 诱导产生的愈伤组织在 1 材料与方法 接种到增殖培养基 ：MS+ZT0．05mg／L+NAA0．05mg／L 1．1 实验材料 +IBA0．05mgL，附加琼脂 7．5g／L、蔗糖 30g／L上进行 1l—l2月 ，采集未开放花蕾 (直径 0．5cm左右)。 增殖。 1．2 实验方法 1．2．5 培养条件 培养温度 25℃±l℃，光照强度 1．2．1 预处理 采集下的新鲜花蕾于 4℃冰箱 中保 2000Lx，光照时间 16h／d。 存 48h。 2 结果 1．2．2 外植体消毒 的比较试验 采用 3种方式对外 2．1 外植体消毒方式对外植体的影响 植体消毒。方式一 ：花蕾一花药 4％次氯酸钠处理 花药接种 2周后 的污染情况和 5周后愈伤组织 20mim 无菌水冲洗 35次 接种 。方式二 ：花蕾一 的生长情况见表 1。从试验统计数据来看采用 0．1％ 花药一O．1％升汞处理 6min一无菌水冲洗 3～5次一 升汞处理剥离下的花药灭菌效果是最好的，污染率 接种。方式三 ：花蕾一0．1％升汞处理 8min一无菌水 最低 ，但 同时对花药 的伤害也是最大的，接种后 的花 药活性明显较差 ，对进一步的试验不利 ；用 0．1％升汞 基金项 目：西华师范大学博士启动基金项 目(09B002) 处理花蕾的方式花药能保持较高的活力 ，但是污染 作者简介 ：秦红玫 (1978一)，女 ，四川南充人 ，博士 ，讲师 ，主要 从事 园林植物及经济林生物技术研究。 率高。采用 4％次氯酸钠处理剥离下的花药 ，污染率 E—mai