刺五加AFLP分子标记技术体系的建立.pdfVIP

第 6期 (总第 109) 中 国 林 副 特 产 No．6(GSNO．109) 2010年 12月 ForestBy—ProductandSpecialityinChina Dec．2O10 刺五加 AFLP分子标记技术体系的建立 刘克武 ，于洋。 (1．黑龙江省林副特产研究所 ，黑龙江省非木质林产 品研发重点实验室，牡丹江 157011； 2．北京林业大学材料科学与技术学院) 摘 要 ：：用改 良的的试剂盒法提取刺五加 叶片的基 因组 DNA，可以获得 高质量 的刺五加基 因组 DNA， DNA 降解较少、污染低 、电泳条带清晰，可 以用于 PCR扩增反应 ，可以被 内切酶 EcoRI和MseI彻底消 化 。通过优化酶切反应 、引物连接 、预扩增 、选择扩增 ，建立 了优化 的刺五加 AFLP分析技术体系，从 64 对 引物 中筛选到 5对高效扩增引物 ，并利用这 5对 引物在 6个刺五加种源中获得 了89个多态性 AFLP 分子标记 。建立 了利用红外荧光检测技术和 Ii—Cor4300DNA分析 系统，进行刺五加 AFLP分析的分子 标记技 术 。 关键词 ：刺五加 ；DNA基 因组；AFLP分子标记 Establishment0fAFLP AnalysisSystem forAcanthopanaxsenticosus LiuKewu ，YuYang2 (1．HeilongjiangProvinceInstituteofForestBy-ProductandSpeciality，Heilongjiang Non-woodForestProductKeyLaboratory，Mudanjiang157011； 2．CollegeofMaterialScienceandTechnology，BeUingForestryUniversity) Abstract：TheimprovedmethodofDNA isolationwasusedtoextractgenomeDNA from leavesofAcall- thopanacissenticosl，andhigherqualitygenomeDNA wasobtained，thatofstripsinagaroseelectropho— resiswereclearandlessdecomposed，couldbeusedforPCR．TheseDNA sampleswithhighpurification wereintactwithoutcontaininginhibitorofenzymereactionandcouldbecompletelydigestedbyrestriction enzymessuchasM seIandPstI．Thesystem ofamplifiedfragmentlengthpolymorphisms(AFLP)tech— niquewasestablishedsuccessfullybyprocesseslikerestrictionenzymesdigestingreaction，preamplifica— tion，andselectiveamplification．ThefingerprintingsofAc盘 ￡^0户口 口c senticoslwereobtainedbythese processes，andthereproducibmtywashigh，fivepairsofprimerswithhighpolymorphism andpowerful distinctivenesswereselected from sixty—fourpairsofprimers，and got89 polymorphism markersfor