一株柑橘木虱虫生真菌的分离与鉴定.pdfVIP

　 　 ２０１３年第１０期 １　３１９ 文献著录格式: 鹿连明ꎬ 杜丹超ꎬ 胡秀荣ꎬ 等. 一株柑橘木虱虫生真菌的分离与鉴定 [Ｊ]. 浙江农业科学ꎬ２０１３ (１０): １３１９－１３２２. 一株柑橘木虱虫生真菌的分离与鉴定 鹿连明ꎬ 杜丹超ꎬ 胡秀荣ꎬ 蒲占湑ꎬ 张小亚ꎬ 陈国庆 (浙江省柑桔研究所ꎬ 浙江 台州　 ３１８０２６) 　 　 摘　 要: 从浙江省台州地区柑橘园中采集的柑橘木虱 (Ｄｉａｐｈｏｒｉｎａ ｃｉｔｒｉ) 虫体中分离得到一株虫生真菌ꎬ 将 其命名为ＧＪＭＳ０３２ꎬ 就该菌株对柑橘木虱的致病性、 培养特征和形态特征进行了测定ꎬ 并对其ＩＴＳ１￣５８Ｓ ｒＤＮＡ￣ ＩＴＳ２基因序列进行了分析ꎮ 结果显示ꎬ 该菌株对柑橘木虱具有较强的致病性ꎬ 柑橘木虱经浓度为 １０ × ９ －１ １０ ｓｐｏｒｅｓ ｍＬ 的菌株ＧＪＭＳ０３２ 的分生孢子悬浮液处理后７ ｄꎬ 其校正死亡率达９８％ꎮ 该菌株的培养特征、 形 态特征与曲霉属真菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｗｅｓｔｅｒｄｉｊｋｉａｅ较为一致ꎬ 其 ＩＴＳ１￣５８Ｓ ｒＤＮＡ￣ＩＴＳ２ 序列也与Ａ. ｗｅｓｔｅｒｄｉｊｋｉａｅ 表现出 １００％的相似性ꎬ 因此将菌株ＧＪＭＳ０３２初步鉴定为Ａ. ｗｅｓｔｅｒｄｉｊｋｉａｅꎮ 关键词: 柑橘木虱ꎻ虫生真菌ꎻ分离ꎻ鉴定 中图分类号: Ｓ４３６６６　 　 　 文献标志码: Ａ　 　 　 文章编号:０５２８￣９０１７(２０１３)１０￣１３１９￣０４ 　 　 柑橘木虱 (Ｄｉａｐｈｏｒｉｎａ ｃｉｔｒｉ) 属同翅目木虱科ꎬ 生真菌资源ꎬ 为将来柑橘木虱生防菌的开发利用提 是柑橘、 柠檬、 黄皮、 九里香、 枸杞等芸香科植物 供材料ꎮ 新梢期的主要害虫ꎬ 也是传播柑橘黄龙病的唯一自 １　 材料与方法 然虫媒ꎮ 柑橘黄龙病作为当前柑橘生产上防治最 难、 威胁最大的一种毁灭性病害ꎬ 对柑橘产业的稳 １１　 供试虫源 定和发展带来了严重威胁ꎮ 但目前对该病害尚未获 分离病原菌所用的柑橘木虱虫体采集于浙江省 得有效的防治药剂ꎬ 以防治柑橘木虱为主的综合防 台州市黄岩区不同柑橘园内ꎻ 测定病原菌的致病性 治是当前该病害防控的主要办法ꎮ 因此ꎬ 加强对柑 所用的健康柑橘木虱成虫为浙江省柑橘研究所温室 橘木虱的防治ꎬ 无论对于控制柑橘黄龙病的流行还 中九里香植株上常年继代饲养的种群ꎮ 是降低虫体本身对柑橘的危害都具有重要意义ꎮ １２　 试剂和培养基 目前对柑橘木虱的防治多采用化学防治措施ꎬ ｄＮＴＰ、 ｒ￣Ｔａｑ酶等 ＰＣＲ 相关试剂ꎬ ＴａＫａＲａ 公 由此造成了农药残留、 环境污染、 生物多样性破坏 司ꎻ ＣＴＡＢ、 巯基乙醇、 异丙醇ꎬ Ａｍｅｒｓｃｏ 公司ꎻ 和柑橘木虱抗药性等诸多问题ꎬ 而生物农药以其高 核酸染料ＧｅｌＲｅｄꎬ Ｂｉｏｔｉｕｍ公司ꎻ 凝胶回收试剂盒ꎬ 效、 低毒、 低残留、 无污染、 不易产生抗药性和原 Ａｘｙｇｅｎ公司ꎮ 其余试剂为国产分析纯ꎮ 料易得等特性被认为是未来化学农药的理想替代药 用于病原真菌分离培养所用的培养基为马铃薯 剂ꎮ 国内外研究者在利用植物提取物、 昆虫天敌和 葡萄糖琼脂 (ＰＤＡ) 培养基ꎮ 称取２００ ｇ 马铃薯ꎬ 生防菌等防治柑橘木虱方面进行了诸多有益的尝 洗净去皮切碎ꎬ 加水１０００ ｍＬ煮沸０５ ｈꎬ 纱布过 [１] 试 ꎬ 但研究多处于实验室阶段ꎬ 在农业生产中 滤ꎬ 再加２０ ｇ葡萄糖和２０ ｇ琼脂ꎬ 充分溶解后用 利用生防菌制剂成功防治的实例尚未见报道ꎮ 因 热纱布过滤ꎬ 分装至锥形瓶或玻璃试管