水稻根系土壤微生物脂肪酸生物标记空间分布特性研究.docVIP

水稻根系土壤微生物脂肪酸生物标记空间分布特性研究 摘要： 关键词：微生物，脂肪酸生物标记，水稻，空间分布 前言 材料与方法 1、材料 供试水稻品种有30个，均为福建省农业科学院水稻研究所提供的近几年育成的品种，具体品种名称见表1 表1 水稻品种名称 序号 品种名称 序号 品种名称 SM1 Ⅱ优早恢92选 SM16 明恢86（恢复系） SM2 Ⅱ优HK05（Ⅱ-32A/HK05） SM17 航1号（RH77）恢复系 SM3 Ⅱ优455（Ⅱ-32A/YO3） SM18 航2号（制5）恢复系 SM4 Ⅱ优HK02（04HK02，建宁种） SM19 汕优63 SM5 Ⅱ优355（Ⅱ-32A/Y25） SM20 Ⅱ优明86（Ⅱ-32A/明恢86） SM6 Ⅱ优797（Ⅱ-32A/Y18） SM21 Ⅱ优航1号（Ⅱ-32A/航1号） SM7 天优制5（天丰A/制5） SM22 Ⅱ优航2号（Ⅱ-32A/航2号） SM8 天优航653（天丰A/航653） SM23 金生优制5（金生S/制5） SM9 中新优制5（中新A/制5） SM24 金生优航653（金生S/航653） SM10 兴优制5（兴A/制5） SM25 新安优制5（新安S/制5） SM11 兴优HK02（兴A/HK02） SM26 两优航2号 SM12 川优167（川香A/MR167） SM27 准优HK05（准S/HK05） SM13 宜优HK02（宜香A/HK02） SM28 准优航653（准S/航653） SM14 44优167（湖南44A/MR167） SM29 家团 SM15 明恢63（恢复系） SM30 金农32号 2 方法 2.1田间试验设计 试验于2008年5月－11月在福建省沙县夏茂镇长富村水稻研究基地1、2、3号田进行。于5月16日播种，大棚旱育苗；6月26日插秧，每块田为一个小区即为一次重复，四周设有保护行，每块田分为30个单元，每单元一个品种，顺序排列(小区图示见图1-2)，小区总面积3.6m2，每个单元3行，行长4m，行距30cm，穴距13cm，每穴插一棵苗，正常大田管理，生育期间调查抽穗期。9月25日收早熟，10月22日收中熟品种，11月8日收晚熟品种。品种考种方法：收获时取每个区组中间10株水稻，考种项目有株高，穗数，粒数，结实率，千粒重，并计算亩产。 2.2水稻根际土的采集备 采用“抖根法”，即先将植株根系从土壤中挖出，抖掉与根系松散结合的土体，然后将与根系紧密结合在0-4mm范围的土壤用刷子刷下来作为根系土壤。采样时间为水稻孕穗期，每单元按“蛇形法”随机选5个点采集根系混合样品，装袋迅速带回实验室测定磷脂脂肪酸，每个样品重复3次。 2.3 水稻根系土壤脂肪酸生物标记（PLFAs）的提取和检测方法 PLFAs法的提取过程和分析参考Frosteg?rd和Kourtev方法[11-12]，具体步骤包括：（1）脂肪酸的释放与甲酯化：取15g土样于50mL离心管中，加入15mL的0.2moL/L的KOH甲醇溶液，斡旋振荡5min，并于37℃水浴温浴1h，每10min斡旋一次；（2）中和溶液pH值：加入加入3ml 1.0mol/L的醋酸溶液中和，充分摇匀；（3）脂肪酸的萃取：加入10ml正己烷，充分摇匀，800r/min离心15min，打开管盖，利用干净的移液管取出每隔样本的下层似水部分于干净的小三角瓶中，放入；（4）转移：在玻璃试管中加入0.5ml体积比为1︰1的正己烷︰甲基丁基醚溶液，充分溶解3－5min，转入GC小瓶，用于脂肪酸测定。 PLFAs的检测采用美国Agilent6890N型气相色谱仪，包括全自动进样装置、石英毛细管柱及氢火焰离子化检测器；在下述色谱条件下平行分析脂肪酸甲酯混合物标样和待检样本：二阶程序升高柱温，l70℃起始，5℃/min升至260℃，而后40℃/min升温至310℃，维持90s；汽化室温度250℃、检测器温度300℃；载气为H2(2ml/min)、尾吹气为N2(30ml/min)；柱前压l0.00 psi(1psi=6.895kPa)；进样量lμl，进样分流比100:1。PLFAs的鉴定采用美国MIDI公司(MIDI, Newark, Delaware, USA)开发的基于细菌细胞脂肪酸成分鉴定的SherloсkMIS4.5系统(Sherloсk Miсrobial Identifiсation System)。 2.4数理统计 2.3.1 水稻根系土壤微生物脂肪酸生物标记频次和总量 脂肪酸生物标记在水稻根系土壤中出现的种类数为水稻根系土壤微生物脂肪酸生物标记频次S，而每一品种水稻根系土壤所有微生物脂肪酸生物标记含量总和即为水稻根系土壤微生物脂肪酸生物标记总量N。 2.