民猪BMP2基因的冷诱导研究.pdfVIP

黑龙江农业科学 2010(11)：4～5 HeilongjiangAgriculturalSciences ◆生物技术◆ 民猪 BMP2基因的冷诱导研究 张冬杰 (黑龙江省农业科学院 畜牧研 究所 ，黑龙江 哈尔滨 150086) 摘要 ：以 75 日龄民猪为试验材料，将骨形成蛋 白2(BMP2)基因作为影响民猪抗寒特性的候选基 因，对其在低 温冷诱导后在 民猪肌 肉组织 内的表达变化情况进行 了分析 。结果表明：BMP2基 因在 民猪冷诱导前后表达 水平没有显著 变化 。 关键词 ：民猪 ；BMP2基 因；表达 ；冷诱导 中图分类号 ：$828 文献标识码 ：A 文章编号 ：1002—2767(2010)11-0004—02 东北 民猪是起源于东北的一个古老的地方猪 1．2．2 引物的设计与合成 根据 GenBank上 已 种 ，是我国华北型地方猪种的主要代表 。民猪与 公布的猪 的 BMP2基 因 (AY669080)和 fl-actin 我 国其他地方猪种相 比，一个最为明显的特征就 基因 (AK24O355)序列设计引物，引物序列如下： 是抗寒性强_l1]。但多年来 ，人们对 民猪抗寒性 的 BMPF：5’一AACCTGCAACAGCCAACT一3’，BM— 研究还一直局限在对其表观性状 的观察与分析 ， PR：5’一GTGACTAGCAAGGGTCTTATTT一3’； 该研究采用实时定量 PCR技术，对可能影响民猪 actinF： 5’一CGGGACCTGACCGACTACCT一3’， 抗寒特性 的候选基 因一 一骨形成蛋 白2(BMP2) actinR：5_GGGCCGTGATCTCCTTCTG一3’。送 在常温和低温时表达水平变化进行 了研究 ，这对 交上海生工合成 。 于进一步深入研究 民猪抗寒特性 的遗传机理 ，以 1．2．3 Real—timePCR反应体 系与反应条件 及充分合理利用民猪资源，丰富我国在低温生物 反应体系：上、下游 引物各0．8 L，Mix10 L，模 学研究领域的研究成果都具有重要意义。 板0．8ttI，H2O 7．6ttL，共计2O L。反应程序如 1 材料与方法 下 ：95℃ 10min，95℃ 30S，60℃ 1min，40个循 环 。试验结果表示为 AACt一 (Ct，目的基 因一Ct， 1．1 材料 管家基 因)实验组一 (Ct，目的基 因一Ct，管 家基 75日龄民猪 3窝共计 12头，将每窝个体随 因)对组，2。八 计算 BMP基因mRNA相对表达 机分成 2组即常温组和低温组 ，每组各 6头 ，均 由 水平 。反应条件为 95℃ 10min，40个循环：95℃ 黑龙江省农业科学院畜牧研究所提供 。2009年 15S，6O-C1min，循环终止，加熔解 曲线。 12月 25日到 2O1O年 1月 6日期间，将常温组置 1．2．4 BMP2基 因冷诱导后表达变化 将常温 于正常舍内饲养，温度控制在 1O。C左右，低温组 组和低温组不同个体肌 肉的cDNA分别混合 ，获 在舍外半敞式大棚 内饲养 ，平均温度为一2OuC，两 得 2个 cDNA池