鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR检测方法的建立.pdfVIP

中国摩亏通提 2009，25(05)：14—17 ChineseAgriculturalScienceBulletin 鸡传染性支气管炎病毒RT—PCR检测 方法的建立 程晓霞 ，王 劭 ，朱小丽 ，陈仕龙 ，林锋强 ，陈少莺 (福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州350013；福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州350013) 摘 要：根据GenBank上发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)基因序列，针对IBVM基因全序列设计合 成了一对引物，以IBV疫苗株为模板，建立了检测IBV的RT-PCR方法。应用该方法对IBV疫苗株RNA 进行扩增，获得与预期大小相符，长度为1105bp的特异性 目的片段；敏感性测定该RT-PCR可扩增到 l8 pg的IBV-M．cDNA。结果表明建立的RT-PCR方法对IBV的检测敏感性高、特异性强，可用于IBV感染 的诊断和流行病学调查。 关键词：鸡传染性支气管炎病毒；RT-PCR；检测 中图分类号 ：S8 文献标识码 ：B DevelopmentofRT—PCRM ethodforDetectingInfectiousBronchitisVirus ChengXiaoxia一，WangShao。，ZhuXiaoli，ChengShilong ，LinFengqiang ，ChenShaoying， (In‘stituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，FuJianAcademyofAgricultureSciences，Fuzhou350013； FajianAnimalDiseasesControlTechnologyDevelopmentCemer。Fuzhou350013) Abstract：A pairofprimersweredesignedandsynthesizedbasedonthesequencesoftheIBV genomes，and theRT—PCRmethodtodetecttheinfectiousBronchitisvirus(IBV)weredeveloped．Thel105bpspecifical fragmentwereobtainedfrom theIBVvaccinestrainRNAbythisRT—PCR．ThesensitivityofRT—PCRreached t02．85ng IBV—M—cDNA．Theseresultsshowed thattheRT—PCR method to detectIBV wereofbetter specificityandhighersensibility．TheresultsshowedthatthisPCR techniquewasspecificandappliedtoIBV diagnosesandepidemiologyinvestigation · Keywords：infectiousbronchitisviurs．RT—PCR．detection 鸡传染性支气管炎 (AvianInfectiousBronchitis， IBV属冠状病毒科，其血清型多变，致病性复杂。 IB)是由鸡传染性支气管炎病毒 (InfectiousBronchitis 中国鸡传染性支气管炎流行株为：Mass、T、Hotle、Gray Virus，IBV)引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性 株，以及大量的变异毒株，临床诊断上可分为呼吸型、 呼吸道疾病。IB呈世界分布，是危害世界养禽业的重 腺胃型、肾型、肠型等 。但只凭这些临诊剖检往往不能 大传染病之一n。其特征是：病鸡气管哕音、咳嗽和打 准确判断病因．必须依靠实验室检测[2。。随着现代分 喷嚏，主要侵害鸡 的呼吸、泌尿生殖和消化系统等。该 子生物学技术的发展，国内许多学者 已经将RT-PCR 病发病率很高，可致幼鸡死亡。成年产蛋鸡群感染则