携tPA和VEGF165基因共表达质粒生物学功能研究.pdfVIP

维普资讯 中华普通外科杂查290生 箜 鲞笙 ril2(x)5，V01．20，No．4 · 207 · ． 论 著 ． 携 tPA和VEGF165基因共表达质粒 生物学功能研究 吴忠均 朱毅 时德 郑树森 摘【要】 目的 观察组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮生长因子 165(VEGFI65)基因在血管 内皮细胞(VEC)中的表达产物对VEC增殖和纤溶的影响。方法 将含有tPA和VEGF165的共表达质 粒DBudCE4．1／tPA—VEGF165导入 VEC中，RT-PCR法和Westernblot法分别从nnRNA水平和蛋白质水平 检测被转染VEC中的tPA和VEGF165表达；纤溶蛋白板法检测转基因VEC培养液的纤溶活性；用 H 胸腺嘧啶核苷掺入法(H—TdR)和流式细胞技术观察转基因VEC培养液对 VEC和VSMC增殖的影响 结果 pBudCE4，1／tPA—VEGF165转染VEC后，tPA和 VEGF165分别在 nd~NA和蛋白质水平均有表达 ； 转基因培养液有纤溶活性，并对 VEC增殖有显著作用，而对 VSMC增殖无作用。结论 pBudCFA．1／ tPA—VEGF165能在 VEC表达出有生物学活性的tPA和VEGF165。 关【键词】 内皮，血管；基因表达；组织纤溶酶原激活物；血管内皮生长因子 A study伽 biologicalactivityofco-expressionplasmidofhumantissueplasminogenactivatorandvascular endothelialgrowth矗K妇 165 WUZhong-jun ，zHU t sHlDe，zHENGShu-sen． OrganTransplant Center．theFirstAffdiatedHospital，ZhejiangUniversity，Hangzhou310003，China Correspondingauthor：WUZhong-j~n，E-mail：wzjxdfpxy@zju．edu．cn A【bstract】Objective Toobservetheco-expressionplasmidoftissueplasminogenactivator(tPA)and vaseularendotheliagrowthfactor165(VEGF165)invaseularendothelialcell(VEC)andtostudytheeffectofthe productonhteproliferationofVECandfibrinolysisactivity．Methods pBudCE4．1／tPA—VEGF165Was transfected intoVECsbyusinglipofection，111eexpressionoftPAnadVEGF165atmRNAlevelWasdetectedby PCRand expressionatprotein levelWas detectedbyWestem blot．Thefibfinolysisactiviyt ofVEC culturesolution of transfectingtPAnadVEGF165genesweredetectedbyfibrinplatetechnique．TheVECandVSMCwerecultured wi出、rEC culture solution oftransformingtPA nadVEGF165genes．theproliferation ofVEC andVSMCwere evaluatedwiht H一I incorporationnadflowcvt0metrv(FCM)．Results TheexpressionoftPAandVEGF165in thetrnasfeetedVECswasdetcetde ．Th efibrinolysisactiviyt of transfectde VECculturesolutionw