siRNA干扰cytohesins导IGFR信号减低致前列腺癌细胞中.pdfVIP

实用肿瘤学杂志 2011年第25卷第4期总第 114期 · 361 · siRNA干扰 cytohesins导致前列腺癌细胞 中 IGFR信号减低 赵 锐 孔祥波 金 宁 张 刚 【摘要】 Cytohesins在前列腺癌的IGFR信号转导中发挥重要作用。siRNA干扰cytohesins可以减低 前列腺癌的IGFR信号，表明cytohesins可以成为治疗前列腺癌的一个新靶点。 【关键词】 Cytohesins；IGF一1R；信号转导；前列腺癌；siRNA干扰 【中图分类号】 R737．25 【文献标识码】 A doi：10．3969／j．issn．1002—3070．2011．04．016 胰岛素样生长因子 一1(IGF一1)及其受体 提取试剂盒购 自Invitrogen。CYT一1抗体，IGF一 (IGF一1R)与肿瘤细胞的凋亡、转化、浸润性生长 1R抗体购 自SANTA CRUZBIOTECHNOLOGY， 及远处转移有关 ¨J。肿瘤细胞的IGF一1R表达的 INC；磷酸化 AKT1(pAkt1)抗体，pIRS1抗体， 高低 ，在一定程度上决定了该肿瘤细胞的致瘤性及 pp44MAPK(pErk1)抗体，C—Myc抗体 ，cyclinD1抗 转移特性，阻断IGF一1R信号的转导将会恢复细胞 体，GAPDH抗体等单克隆一抗，荧光标记羊抗鼠二 的表型，促进凋亡，提高化疗药的敏感性，并减小肿 抗，HRP标记 羊抗 鼠二抗购 自abcam；甲唑蓝 瘤细胞转移的倾向[23。IGF一1与 IGF一1R结合激 (MTT)购 自Sigma；M—MLV逆转录试剂盒购 自 活下游的信号传导通路发挥广泛的生物学作用，在 Promega；2×SYBR real—timePCR试剂 盒购 自 前列腺癌的发生、发展和转移 中也扮演重要角 Roche公司；BCA蛋 白定量试剂盒，ECL发光检测 色 J。张超等 J2009年通过对 26例前列腺癌和 试剂盒购 自Pierce~ 30例 良性前列腺增生标本研究也证实 IGF一1和 1．2 细胞 IGF一1R与前列腺癌的发生发展可能有关。 人膀胱癌细胞系PC一3M 由吉林大学基础医 Cytohesins蛋 白家族 (CYTs)是一组二磷酸腺 学院提供，用 DMEM(含 10％小牛血清)在 CO 培 苷核糖基化因子 (ARF)鸟苷三磷酸酶的鸟嘌呤核 养箱中培养，用0．25％胰蛋 白酶一EDTA消化液消 苷酸交换因子，最近成为脊椎动物和无脊椎动物生 化传代。 物学重要的信号转导调控子，其作用是调控细胞骨 1．3 Cytohesins表达 ． 架再组装 以及整合素活化或整合信 号系统 J。 收集PC一3M细胞，提取总RNA，合成cDNA， Hafner等(2006) 使用cYTs类似物SecinH3抑制 再用引物扩增 CYT一1，CYT一2，CYT一3基因，具 人肝细胞和小 鼠的 CYT基因，结果表 明胰岛素受 体步骤见qPCR；提取总蛋 白，进行Westernblot，具 体复合体关联的CYTs为肝细胞中胰岛素信号系统 体步骤见Westernblot检测。 所必须，抑制CYTs导致肝脏胰岛素拮抗。 1．4 siRNA干扰 IGF与胰岛素相关性很大，IGFR与胰岛素受体 PC一3M细胞以2×10／mL的浓度接种到6孔 (IR)的信号转导通路相同，因此，CYTs可能在 IGF 板 ，孔 内放 1mL含 10％小牛血清的 DMEM培养 一 1R的信号转导中发挥重要作用。 液，培养24小时。去掉培养基 ，加入 200IxL无血 1 材料与方法 清