毕赤酵母高密度发酵产植酸酶的研究.pdfVIP

维普资讯 ·500 · 广西农业科学 2004年第35卷第6期 毕赤酵母高密度发酵产植酸酶的研究 李 茹 ， 陈 鹏 ， 梁运祥。 (1．黄冈师范学院生物系， 湖北黄冈 438000； 2．华中农业大学生科院) 摘要 ：以基因工程菌Pi pasf。r 为实验菌株，采用液态发酵方式生产植酸酶，对高效产酶的生产条件做 了初步 研究 。结果表明：最有利于产酶的条件是：甘油4 、硫酸铵 1 、接种量 1 、KHzPO 含量0．8 ，Jgj~pH对产酶有 显著影响。 关键词 ：毕赤酵母 ；植酸酶 ；培养条件 中图分类号 ：TS202．3 文献标识码：A 文章编号 ：11【02—8161(2004)06—0500—03 Productionofphytasebyhigh--densityfermentationofPichiapastoris LIRu ，CHEN Peng ，LIANG Yun—xiang (1．BiologyDepartmentofHuanggangNormalCollege·Huanggang438000； 2．CollegeofLifeSciences，AgriculturalUniversityofCentralChina) Abstract：Thetestlinkedtheproductionofphytasewithageneticengineering strainofPichiapastorisbyliquid fermentation．Theproductionconditionsofhighyieldofthephytasewastested．Theresultindicatedthatthemost favorableconditionsfortheproductionare4 glycerol，1 of(NH4)2S04．1 seedinoculationvolumeand0．8 KH2PO4．Inaddition，theproductionwaseffectedsignificantlybytheinitialpH． Keywords：Pichia pastoris；phytase；cultivationcondition 植酸又名肌醇六磷酸 ，具有强络合能力 ，能络合 1 材料与方法 重要的矿物质离子 ，使含植酸食品的营养价值和生 物利用率降低 ，影响动物对营养的吸收，还在很大程 1．1 材 料 度上降低磷的有效浓度。植酸酶 (Phytase)是一种新 实验菌株 ：毕赤酵母GS115一phyAF150706，华 型食品与饲料添加剂 ，它能催化植酸 (盐)水解为肌 中农业大学提供的基因工程菌株；贮备液；培养基： 醇及无机磷酸，促进微量元素及蛋白质等营养成分 YPD培养基 ；试剂：醋酸缓冲液 ，植酸钠溶液 ，1O 的吸收而受到人们的关注_l]。植酸酶虽然广泛地存 TCA溶液，钼酸铵溶液，KH。PO 溶液。 在于动物、植物及微生物内，但由于动物中植酸酶含 1．2 酶活测定方法 量很低，植物中的植酸酶因加工、储藏等因素易被破 原理 ：植酸酶能将植酸钠分子上的磷水解释放， 坏，因此 ，真正具有开发价值的仅限于微生物经发酵 磷与钼酸铵反应生成稳定的蓝色络合物，该络合物 生产植酸酶 “j。霉菌生产的植酸酶比大多数植物产 在750nm的波长下有最大吸光值。通过分光光度法 生的能耐更宽的pH范围，但不耐热 ，在60C以上开 测定络合物数值，并依此计算酶活。 始被破坏，且酶活性不高，难以达到大批量生产的要 1．2．1 绘制标准曲线：配制浓度分别为0．2、0．4、 求，而植酸酶基因工程技术能克服以上的不足。