nNOS介导小鼠局灶性脑梗死后氧化DNA损伤的机制研究.pdfVIP

维普资讯 第 29卷第 1期 同济 大 学 学 报 (医学版 ) Vo1．29No．1 2008年 2月 JOURNALOFTONGJIUNIVERSITY (MEDICALSCIENCE) Feb．，2008 · 基础 研 究 · nNOS介导小鼠局灶性脑梗死后 氧化 DNA损伤的机制研究 黄东雅，孙 慧，左 联 (同济大学附属东方医院神经内科，上海 200120) 摘【要】目的 探讨还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)阳性神经元表达与脑梗死后DNA损伤修复 过程的相关性。方法 制作小鼠前脑缺血一再灌注模型(Fb )，夹闭双侧颈总动脉90min后恢复血流，再灌注 15 min后处死动物制作脑组织冰冻切片。A组(=10)：FblR90／15min；B组(=4)：FblR90／15min+3BR7NI；C组(= 10)：假手术时照组；D组 (=4)：采用组织化学染色法观察NADPH-d阳性神经以元的分布。A、B两组分别用大肠杆 菌核苷酸外切酶Ⅲ敏感位点法(escheHcha／co／iexonudeaseIIIsensitivesites，EXO6S)检测AP位点和3-PO4末端型两种 氧化DNA损伤。用EXO6S检测AP位点和3-PO4末端型 两种氧化DNA损伤；采用组织化学染色法观察NADPI4d 阳性神经元的分布。结果 EXOSS法可检测到大脑不同部位的氧化DNA损伤，主要集中在大脑皮质区、下丘脑弓形 核区、纹状体和海马区；特异性N06抑制剂3BR7NI明显减弱全脑的EXO6S信号强度(P0．0001)，差异有显著性 ， 其作用主要表现在大脑皮质区，而时下丘脑的弓型核等区作用较弱；NA d阳性神经元主要分布在大脑皮层、纹 状体、丘脑和齿状核，下丘脑的弓型核区仅见少量染色，EXO6S／NADPH-d的表达时比显示，在大脑皮质区EXO6S信 号主要在NADPH-d阳性神经元中。结论 脑梗死后大脑不同区域氧化DNA损伤的机制不一。3BR7NI仅消除大脑 皮层区的EX(~S染色，而对下丘脑弓形核区的作用不大，本研究从形态学证实了大脑皮层区nNO6可能参与了脑梗 死后氧化DNA损伤修复过程，而下丘脑的弓型核 区的这一过程可能有其他机制参与。 【关键词】脑缺血佴 灌注；氧化DNA损伤；NADPH-d 【中图分类号】R743 【文献标识码】A 【文章编号】1008—0392(2008)01—0012—05 ExperimentalstudyonoxidativeDNA damageafter focalinfarction inducedbynNOSinbrain HUANG Dong-ya，SUN Hui，ZUO Lian (Dept．ofNeurology，EastHospital，TonalUniversity，Shanghai200120，China) A【bstract】Objective TostudythecorrelationofexpressionsofNADPH—dpositiveneuronsandoxidative DNAdamageafterbraininfarction．Methods Forebrainischemia-reperfusion(FblR)WaSinducedbyoccluding bothoclYlnloncarotidarteriesfor90mins，followde by15minsofreperfusion．Forebrainsect