水稻RuBPCase小亚基基因（rbcS）全长cDNA的克隆和分析.pdfVIP

维普资讯 浙 江 大 学 学 报 (理学版) JournalofZhejiangUniversity(ScienceEdition) Vo1．32No．3 第 32卷第 3期 May 2005 2005年 5月 http：／／www．journals．zju．edu．cn／SCl 水稻 RuBPCase小亚基基因 (rbcS) 全长 cDNA 的克隆和分析 向 太 和 (杭州师范学院 生命科学学院 ，浙江 杭州 310036) 摘 要 ：根据 国际核酸数据库 中不同植物的RuBPCase小亚基基 因(rbcS)保 守序列设计 PCR 引物 ·首先扩增 出约 350bp的cDNA短片段 ，以此作为分子杂交探针对构建的水稻 c1)NA文库进行杂交筛选，同时结合 PCR分析确定 阳性克隆 中cI)NA 片段的大小，选取插入的cDNA 片段 最长的阳性 克隆进行测序分析验证 ，从 而克隆 了水稻中编 码RuBPCase小亚基的全长cDNA(GenBank登记号：AY445627)．该eDNA片段从第 52bp开始至579bp含有编 码 175个氨基酸的开放 阅读框 (ORF，GenBank登记号 ：AAR19268．1)和一个终止密码子．AY445627在 3端有一 个长 264bp的非编码 区，而在 3末段 有 poly(T) 经 Computepl／M 软件预测，AAR19268．1的等 电点pl和分子 量 M 分别为 9．03和 19630．66Da．通过与 国际核酸和蛋 白质数据库 的blast比较分析 ，AY445627序列与 Gen— Bank登记号 D00644．1(水稻 (1S)、U43493．1(大麦 r S)、AF104250．1(燕麦rbcS)和 M37477．1(小麦 r S)的序 列相似性分别为 99 (650／655)、84 (436／515)、84 (427／506)和 84 (386／456)．而 AAR19268．1氨基酸序列 与 GenBank登记 号 P18566(水稻 rbcS)、AAF07947．1(燕麦 r S)、BAA35162．1(大麦 r S)和 BAB19812．1(小麦 rbcS)的氨基酸序列相似性分别为 98 (173／175)、84 (143／169)、84 (140／166)和 83 (144／173)．生物信息学 的分析还表 明r s基 因不仅在水稻不同品种基 因型之间非常保 守．而且在水稻、小麦、大麦和燕麦等禾本科不同物 种之 间也高度 同源． 关 键 词 ：水稻 ；RuBPCase小亚基基 因；克隆 ；分析 中图分类号 ：Q943．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—9497(2005)03—314一O6 XIANG Tai—he(School Li S( (es，Hangzhou NormalCollege，H angzhou 310036，Chian) Cloningand characterizationofafull—lengthcDNA encoding theRuBPCasesmallsubunit (rbcS)in rice (Oryza sativaL)．JournalofZhejiangUniversity(ScienceEdition)．2005，32(3)：314～ 319- Abstract：BasedonconservedsequencesofRuBPCasesmallsubunitgene (r S)ofdifferentspeciesin nucleotide databases，PCR primersweredesign