阪崎肠杆菌检测技术研究进展.pdfVIP

维普资讯 中国公共卫生 2008年 3月第 24卷第 3期 c^ JPublicHealthMar2008Vo1．24No．3 371 文章编号：1001．0580(2008)03，0371．03 中图分类号：R378．2 文献标志码：A 综【 述】 阪崎肠杆菌检测技术研究进展 李锦程 一，王玉坤 ，曹远银 阪崎肠杆菌(E．sakazakii)是一种周生鞭毛、能运动、无 酶和磷酰胺酶存在与否是阪崎肠杆菌与其他肠杆菌之间2个 芽孢的革兰阴性细菌 1【]，是肠道正常菌群的一种，在一定条件 主要区别，并进一步指出利用该 2种酶反应随机检测重复率 下可引起人和动物致病。感染引起 的死亡率高达 50％以 分别达 89％和 81％。但是 由于产生 的 4一硝基苯酚在琼脂 上~2J。目前检测阪崎肠杆菌的方法主要通过常规生化鉴定和 上很容易扩散影响实验结果观察，因而存在一定的局限性 ~4J。 PCR测定 16SRNA。常规检测方法耗时较长，对检验员的要 Irvrsen等在 (TSA)上加入 5一溴4一氯 一3一吲哚一a—D一葡 求较高，假阴性较高 1【]。PCR法检测费用昂贵，对仪器设备 萄糖苷酸(X~Gle)，a一葡萄糖苷酶的作用于 XaGle只有阪崎 及检测环境的要求很高。血清学检测成本低廉，易于操作。 肠杆菌产生蓝绿色菌落，这种鉴别方法 比传统 FDA方法快 2 研究血清学检测方法不仅可 以辅助常规检测，还可 以积极探 d，敏感性达 100％，特异性达 87．2％。但这种鉴别方法产生 索在临床诊断和流行病学调查中的应用。利用阪崎肠杆菌多 假阳性较多，比对 FDA方法假阴性，各有优缺点C53。Leuseher 克隆抗体进行免疫检测研究可 以辅助鉴定阪崎肠杆菌，在此 等发现，在 TSA上加入 4一甲基伞形花 内酮 一a—D葡萄糖苷 基础上为阪崎肠杆菌血清学分型菌提供依据 ，为进一步深入 酸(a—MUG)可 以鉴别阪崎肠杆菌可疑菌落 。可疑菌落在加 了解该菌提供科学依据。本文对 阪崎肠杆菌的检测方法进行 有 a—MUG的营养琼脂上产生黄色菌落，用紫外线照射发出 了综述 。 荧光，而其他实验菌株可生成黄色菌落，但在紫外线下不发出 1 阪崎肠杆菌的常规检测技术 荧光C63。2004年 OhSW 等利用 a一葡萄糖苷酶作用于底物 a 美 国食 品和药品管理局 (FDA)的检测方法是国际检测阪 — MUG产生黄色菌落的基础上，对培养条件如培养温度、氮 崎肠杆菌的标准生化方法。此外，还有依据该菌生理生化特 源 的种类和剂量以及选择性培养基种类进行优化，指出在胰 征的鉴定方法和 PCR法检测及荧光 PCR等分子检测方法。 蛋白胨含量达 20g／L的胆盐琼脂上，37℃培养 24h具有最佳 我国目前 尚无该菌检测方法的国家标准。只有行业标准。该 检出率[。 标准建立 了阪崎肠杆菌改进的传统检测方法 (经典方法)、普 2005年 OhSW 等 8【]报道 了一种新 的调制婴儿配方奶 中 通 PCR方法和荧光 PCR方法 (快速筛选方法)，其 中改进 的 阪崎肠 杆菌快 速监测方 法，即 96孔板 荧光 最大或然 数 传统方法与FDA方法比较，检测结果一致，但效率大大提高， (MPN)法快速计数。该方法根据阪崎肠杆菌产生的a一葡萄 时间缩短 1／3～1／2。 糖苷酶能分解 a—MUG(OK培养基)产生荧光 ，对添加该底 1．1 生理 生化 检测技术 物的肉汤进行荧光检测 ，通过 96孔微孔板进行 10管 (MPN) 1．1．1 传统生理生化