靶向FMDV受体猪源整联蛋白α_V亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA筛选.pdfVIP

畜牧兽医学报 2011，42(12)：1732—1737 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 靶 向FMDV受体猪源整联蛋白av【亚基基因 抑制 FMDV复制的最佳 siRNA筛选 骆继怀，独军政 ，高闪电，张国锋 ，常惠芸 (中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学 国家重点实验室 国家 口蹄疫参考实验室 甘肃省生物检测工程技术研究中心，兰州 730046) 摘 要：筛选靶向FMDV受体猪源整联蛋 白a 亚基基因抑制FMDV复制的最佳 siRNA。根据猪源 dvmRNA序 列，设计并合成 siRNA，Lipofectamine2000转染 siRNA于PK一15细胞，利用qRT—PCR检测RNAi组(iav480、iv一 1719和 ia一2077)、空 白组 (Mock)和 阴性对照组 (Contro1)中avmRNA表达情况 ；在转染 siRNA12h后通过接种 100TCIDs。，收集病毒液 ，测定 TCIDs。，确定其抗病性变化 。结果显示 ，瞬间转染 PK一15后 ，与阴性对照组和空 白组 相比，3个 RNAi组均不 同程度抑制 a 亚基基 因表达 ，在 24his一480组在 mRNA水平抑制 9O．1 ，作用最 明显。 TCID。测定表明iav-480组有较低的病毒滴度，说明其抗病性增加。针对猪源整联蛋 白av亚基基因的最佳 siRNA 的筛选成功，为深入研究干扰 FMDV受体抗 FMDV转基 因路线奠定了基础 。 关键词 ：FMDV；siRNA；转染 ；PK一15细胞 ；v亚基基 因；病毒滴度 中图分类号：$852．659．6 文献标识码 ：A 文章编号：0366—6964(2011)12—1732一O6 TheOptimum siRNA ScreeningofTargetingPorcineIntegrin SubunitGene asFMDV ReceptorAgainstFM DV Replication LUOJi—huai，DU Jun-zheng，GAOShan-dian，ZHANG Guo-feng，CHANG Hui-yun (StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology ／NationalFoot-and-MouthDisease ReferenceLaboratory，EngineeringResearchCenterofBiologicalDetectionofGansu Province，LanzhouVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences， Lanzhou730046，China) Abstract：Toscreentheoptimum siRNA targetingporcineintegrinavsubunitasFM DV receptor againstFM DV replication，threesiRNA sequenceswereselectedaccordingtoporcineintegrin av mRNA sequence，thecomplementaryDNA containedboth senseandantisenseongonucleotides weredesignedandsynthesized．AfterPK一15cellsweretransectedwithsiRNAsbyLipofectamine 2000，qRT-PCR and100TCID50wereusedtoevaluatethelevelofavexpressionandresistanceof FMDV 0／cHA／99，respectively．Theresultsshowedthatcomparedwithcontrolandmock group，theav s