靶向RANKL基因的siRNA对成骨细胞促破骨细胞生成作用的影响.pdfVIP

维普资讯 四川医学 2007年 6月第 28卷(第6期) Si(ⅢIMfⅢlJo¨，7lul，2007， ．28，Ao．6 ·575 · ●基金论文 ● 靶向RANKL基因的 siRNA对成骨细胞促破骨细胞生成作用的影响 高 坤 ，镐英杰，张 晖，裴福兴△ (四川大学华西医院骨科，四川 成都 610041) 【摘要】 目的 利用 RNA干扰 (RNAi)技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体 (Ligandofreceptoractivatorof NF-KB，RANKL)的表达，观察成骨细胞 RANKL／OPG比值的变化，探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法 合成 4 条RANKL序列特异性小干扰 RNA(siRNA)，用Liopfectamin2000转染成骨细胞，采用荧光实时定量聚合酶链反应 (PCR)检 测RANKL的表达，筛选出最有效的干扰序列，并用Westemblot技术检测成骨细胞的 RANKL、OPG的表达，观察 RANKL／ OPG比例的变化，采用成骨细胞破骨细胞共培养技术探讨转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响。结果 合成的4 对 siRNA中有一对可使大鼠成骨细胞的RANKLmfA水平下降89％，蛋 白表达下降76％；同时OPG的蛋白表达无明显 变化，RANKL／OPG比例明显下调 ，破骨细胞的生成明显受到抑制。结论 RN 沉默 RANKL基因表达可显著下调成骨细 胞 RANKWOPG的比值，抑制破骨细胞的生成。 【关键词】 核激活因子受体配体；RNA干扰 ；大鼠，成骨细胞；基 因沉默 【中图分类号】 R322．71 【文献标识码】 A 【文章编号】 11304-0501(2007)06—0575—03 11leEffectofsiRNA TargetingRANKLOnOsteoclastogenesisInducedbyOsteoblastinVitro．GaoKun。Hao 阮 ·Zhaug Hui。etat．DeponmeraofOrthopaedicSurgery。 ￡ChinaHospital，SiehuanUniversity。c^啦 。Sichuan610041。China A【bstract】 Objective ToobservethechangeoftheratioofligandofreceptoractivatorofNF_KB(RANKL)andOsteoprotegerin (OPG)inrespondstosilencingofhteexpressionRANKLwithRNAinterference(RNAi)Inadexplorehterelationshipbetweenosteoblast nadosteo~lastogenesis．Methods FoursynhtesizedsmallintefferenceRNA(siRNA)were transfcetedintoosteoblastusingLipofec— tamin2000．RANKLll1RNAlevelWasdeterminedbyreal—timequantitativereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT_PCR)． Western blotWas employde toanalyzetIleexpressionofRANKLnadOPG。thentIlechnageofratioofRANKL nadOPG Was observde ． Thewansfcetde cellsnadprimaryratbonemarrowceHswere coculturedtoexplore tIleosteoclastogenesisinducde byosteoblast．Results Th emosteffectivesequencewas foundoutamo