白三叶叶蛋白提取及纯化工艺.pdfVIP

2O52— 2056 草 业 科 学 28卷 l1期 11／2O11 PRATACULTURALSCIENCE Vo1．28，No．11 白三叶叶蛋 白提取及纯化工艺 吕宗友 ，赵 国琦，苏衍菁，邬彩霞，陆银 ，王小山 (扬州大学动物科学与技术学院，江苏 扬州 225009) 摘要 ：以白三叶(Trifoliumrepen5)为材料探讨 了叶蛋 白的提取工艺和纯化方法。对 白三叶叶蛋 白提取 中加热时 间、温度、pH值、料液比、酸的种类等单因素以及纯化试剂甲醇、乙醇、丙酮、四氯化碳、水等进行 了研究。结果表 明，各单因素最佳参数为加热时间9min，温度 9O℃，pH值 4．0，料液比1：2，沉淀的酸为硝酸。对加热时间、加 热温度、pH值和料液比进行 4因素 3水平正交试验，发现影响叶蛋 白提取 因素为 PH值温度时间料液 比， 最佳提取工艺为加热时间9min，温度 8O℃，pH值 4．0，料液 比1：2。对叶蛋 白纯化结果表 明，纯化荆对叶蛋 白 纯度 的影响依次为 甲醇 乙醇丙酮四氯化碳水，但各种纯化剂之间差异不显著(P0．05)。 关键词：白三叶；叶蛋 白；提取 ；纯化 中图分类号：$816．4；$541-。．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—0629(2011)11—2052—05 蛋 白质缺乏是世界性的[1]。高等植物的叶片 真空泵 (郑州长城科工贸有限公司)。 被认为是最有前途的蛋 白质资源。植物蛋白因其廉 1．3试验步骤 价、资源丰富并能满足人类和家畜对蛋 白质的需求， 1．3．1叶蛋白的提取步骤 均匀称取鲜样 5Og，剪 引起了人们极大的关注[2]。开发植物蛋 白质资源 成 lcm左右的小段，按试验要求加入规定量 的水， 成为食品业和饲料业一个亟待解决的问题。 打浆4min，用 3层滤布压滤浆液，弃草渣，将滤液 叶蛋白又称绿色蛋白浓缩物(1ea~proteincon- 调节到规定的pH值后于水浴中快速加热至规定的 centration，LPC)，是以新鲜牧草或其他青绿植物的 温度 ，恒温不同的时间，得絮凝物，过滤得叶蛋白膏， 生长组织 (茎、叶)为原料 ，经打浆压榨后利用蛋白质 65℃烘干得叶蛋白浓缩物成品(图1)。 等电点原理从其汁液中提取的高蛋白浓缩物[4]。白 三叶(Trifoliumrepens)是一种豆科牧草，其青饲 利用期长、粗蛋 白质含量高、管理粗放、柔软细嫩 ，是 重要的种植牧草和观赏草坪草[5。]。 目前，牧草中 的苜蓿 (Medicagosativa)[引、聚合草 (Symphytum peregrinum) 、串叶松香草 (Silpniumperfolia— 图 1 叶蛋 白的提取步骤[J rum)[1。。、酸模 (Rumexacetosa)[n]、黑麦草(Lolium 1．3．2叶蛋白提取单因素设计 分别 以加热时间、 perenne)L1]的叶蛋 白开发均有报道 ，而 白三叶叶蛋 加热温度、pH值 、料液 比和酸的种类 (表 1)作为影 白的研究较少。本试验通过对 白三叶叶蛋白提取和 响白三叶叶蛋白提取率及沉淀率的因素，每个处理 纯化条件的探讨 ，为其开发利用提供参考 。 重复 3次。 1 材料与方法 1．3．3叶蛋白提取的正交设计 在单因素试验的基 1．1材料 白三叶于2010年4月中旬采自扬州大 础上 ，选 4因素 3水平作正交试验设计 (表 2)。由 学动物科技学院草业科学牧草标本区。 于料液比1：5太浪费水，所以舍弃该比例。 1．2仪 器 SGL一300食品料理机(天津达康电器公 1．4计算及分析 叶蛋白提取率及蛋白提取率计 司)；101型电热鼓风干燥箱 (上海市实验仪器总 算