阿尔兹海默病相关基因nicastrin启动子的克隆和鉴定.pdfVIP

中南大学学报（医学版） 2006 ，31（1 ） J Cent South Univ （Med Sci ） 9 * 阿尔兹海默病相关基因nicastrin 启动子的克隆和鉴定 * 杨 眉，蔡 芳，王瑞山，潘 乾，龙志高，邓小云，夏 昆 ，夏家辉，张灼华 （中南大学医学遗传学国家重点实验室，长沙4 10008 ） ［摘要］ 目的：克隆和鉴定与阿尔兹海默病发生有关的 -分泌酶的组成蛋白之一nicastrin （NCT ）基因的启动 γ 子，用于开展其转录调控机制的研究。方法：用PCR 方法从人基因组DNA 中分离NCT 基因编码区上游大小约为 1. 8 kb 的片段并以此为基础对启动子进行两端删除分析，分别扩增大小不等的片段，与pGL3-Enhancer 荧光素酶报 告基因载体质量组，通过瞬时转染Hela 细胞，细胞裂解液进行双荧光素酶活性分析，分离NCT 基因的启动子区。 结果：NCT 基因启动子的420 bp 片段在Hela 细胞中具有最强的启动活性，另237 bp 片段为有活性的最小片段。结 论： NCT 启动子很可能位于翻译起始位点上游- 432/ -133 处，其基础启动子位于-359/ -90 。 ［关键词］ 阿尔兹海默病； nicastrin ； 启动子 ［中图分类号］ Q785 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1672-7347 （2006 ）01-0009-05 Identification and clone of human Alzheimer ’s disease related gene nicastrin promoter YANG Mei ，CAI Fang ，WANG Rui-shan ，PAN Qian ，LONG Zhi-gao ， DENG Xiao-yun ，XIA Kun *，XIA Jia-hui ，ZHANG Zhuo-hua （National Key Lab of Medical Genetics of China ，Central South University ，Changsha 4 10078 ，China ） Abstract ： Objective To identify the promoter of human nicastrin （NCT ）gene ，a major compo- nent of γ-secretase which is closely related with pathogenesis of Alzheimer ’s disease. Methods Promo- ter of human Alzheimer ’s disease related gene ，nicastrin ，a 1 768 bp fragment was firstly isolated from hu- man genomic DNA by PCR. This fragment ’s 3 flanking end was 4 bp upstream to the start codon ATG （+ 1 ）of the gene. This fragment was used as template ，a series of deleted fragments were amplifie