左氧氟沙星与牛血清白蛋白相互作用的液滴荧光法研究.pdfVIP

第28卷，第7期 光谱学与光谱分析 2OO8年7月 and Amlysis July，2008 SpectroscopySpectral 左氧氟沙星与牛血清白蛋白相互作用的液滴荧光法研究 陈泽忠，冯 锋+，杨文娟，梁文娟，李仁军，王 诚 山西大同大学化学化工学院，山西大同037009 摘要采用液滴荧光技术与紫外一可见光度法研究了生理pH值条件下左氧氟沙星和牛血清白蛋白的相互 作用机制。左氧氟沙星对牛血清白蛋白产生荧光猝灭，且猝灭过程是由于复合物形成而引起的静态猝灭。根 不同温度下反应时复合物的形成常数KLB和结合位点数行及对应温度下结合反应的热力学参数，证明二者 主要靠疏水作用力结合。同时采用同步荧光分析技术，对蛋白质与药物结合时构象的变化进行了探讨。 关键词左氧氟沙星；牛血清白蛋白；液滴荧光；结合反应；热力学参数 中图分类号：0657．8文献标识码：A 文章编号：1000-0593(2008)07一1612一05 引 言 (日本YAMAl、0 血清白蛋白是血浆中含量最丰富的载体蛋白，药物进入 化学技术有限公司提供，纯度≥98．o％)，BSA(北京化学试 mo卜L1 血浆后首先与血清白蛋白结合，然后再被运送到身体各部 剂公司提供，电泳纯)，o．9％的NaCl溶液，o．05 位，药物分子与蛋白质之间的复合物通常是借助分子间作用 Tris-Hcl缓冲溶液pH7．40，其他试剂均为分析纯，实验用 力而形成的[1]。这种复合物可称为超分子化合物，是处于生 水为二次蒸馏水。 命科学与化学之间的一个边缘性研究课题，对这类问题的深 1．2实验方法 入研究有助于阐明生物大分子与小分子配体间的相互作用的 (1)将自制液滴附件安装在IS5荧光／磷光／发光光度 化学本质[2。6]。左氧氟沙星是第三代喹诺酮类广谱药物，具计预留的平台上。样品由注射泵泵人，流经恒温水浴槽并在 有抗菌谱广，抗菌能力强、毒副作用低和临床疗效高等特 液滴头形成液滴。氤灯产生的激发光束聚集液滴头，调节液 点【7母j。有关左氧氟沙星(LⅥⅨ)与牛血清白蛋白(BsA)的相滴头的高度，使液滴生长到最大时整个液珠均处于辐射区域 互作用的研究报道较少口…。与常规荧光法相比，液滴荧光法 内。按照样品浓度由低到高的顺序泵人样品溶液，检测样品 中的液滴可充当无光窗光池，且所需样品量少、测试时间 荧光信号变化；(2)在10n止容量瓶中依次加入5．o村。pH mL 短、噪声低，检测灵敏度更高【11．13]。本文采用液滴荧光法研7．40的1一iS_Hcl缓冲溶液，2．oo．9％的NaCl溶液，1．O 究了LⅥⅨ对BsA的猝灭作用，并求出二者的结合常数和rnL1．oo×lO_5 m 结合位点数，考察了药物对血清白蛋白构象的影响，根据热 液，定容恒温静置后，采用液滴荧光法在A州。一284／347 力学参数确定它们之间的主要作用力类型，最后探讨了二者 处测定液滴荧光强度；(3)按同样方法配制样品溶液，扫描 结合的机理。 其同步荧光光谱(舣一60咖)；(4)在lomL容量瓶中加入 5．o 7．40的TriS．HCl缓冲溶液，2．on儿o．9％的 nlI。pH 1实验部分