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《天然皮革定性PCR检测方法》 编 制 说 明 标准起草组 二〇一 年二月 目 录 一、任务来源1 二、标准制订的意义及特点1 三、标准编制原则和依据2 四、标准主要内容确定依据及主要技术路线2 1、标准主要内容确定依据2 2 、主要技术路线3 3、标准的制定过程3 五、分析条件的选择与优化3 1、DNA 提取条件的选择3 2 、最终确定皮革样品的DNA 提取方法4 3、扩增引物的选择5 4 、PCR 反应条件的选择与优化5 5、天然皮革样品的检验结果6 六、其他情况说明10 一、任务来源 本标准根据国家标准化管理委员会《关于下达年第四批国家标准制修订计划 的通知》立项，项目编号为T-469。 本标准由全国质量监管重点产品检验方法标准化技术委员会归口。 本标准由国家皮革制品质量监 检验中心 （广州）、广州市质量监 检测研 究院起草。 二、标准制订的意义及特点 本检验方法标准按照GB/T1.1-2009 《标准化工作导则》的要求编写制定的。 本标准注重科学性和可操作性的结合，有利于标准的推广与应用。 天然皮革主要由哺乳类动物皮毛加工而成，种类繁多。按其种类来分主要有 牛皮革、羊皮革、猪皮革、马皮革等，品种多样，品质各异，价格相差悬殊。常 见的皮革制品有皮鞋、皮带、皮包、皮衣、皮质家具等。随着皮革加工技术的提 高，皮革经过仿制、整饰、压花、剪裁分割和精巧缝制，肉眼几乎难以辨认属于 哪种皮革。一些不法商 为了寻求利益的最大化，以人造革冒充天然皮革或以价 格低廉的皮革如猪皮革等冒充高档皮革，损害了广大消费者的健康和利益，对社 会经济产生了重大影响。 目前皮革真实属性的鉴别主要还是以传统的视觉、嗅觉和触觉为主，随着皮 革加工技术的提高以及科技的发展,各种不同皮革材质的商品在外观甚至手感上 颇为相似, 采用传统的手感和经验目测等手段难以区分皮革产品的材质, 也难 以形成标准，因此, 开发现代分析方法并制定标准进行推广，对皮革的鉴别具有 重要的应用价值。 PCR是聚合酶链式反应(PolymeraseChain Reaction)的简称，它是分子生物 学中广泛运用的一种技术，其主要原理是通过热循环，实现目的基因片段的大量 扩增。目前这项技术越来越广泛地运用于产品的质量检测当中，部分PCR检测方 法已经作为检测方法或标准推广运用，如 《GB/T 19495.4-2004 转基因产品检测 核酸定性PCR检测方法》、《GB/T 23814-2009 莲 制品中芸豆成分定性PCR检测方 法》、《GB/T 23815-2009 猪肉制品中植物成分定性PCR检测方法》、《GB/T 21103-2007 动物源性饲料中哺乳动物源性成分定性检测方法 实时荧光PCR方 1 法》等。 由于各种皮革的动物来源不同，不同种类动物所携带的遗传信息不同，本研 究通过提取、分析皮革中的遗传信息来确定皮革种类，具有高特异性、高灵敏度 等特点。皮革是动物皮经去肉、脱脂、脱毛、软化、加脂、鞣制、染色等物理、 化学加工过程后得到的产品，皮革样品中的DNA在加工过程中遭到不同程度的破 坏。在皮革的鞣制加工过程中，加入了鞣制剂如铬盐等，使皮革成分更加复杂。 如何提取出高质量的DNA成为PCR技术运用于皮革样品检测中的限制性因素之一。 本标准在制定过程中，通过反复比较不同的皮革前处理方法，不断优化皮革DNA 的提取试剂，设计筛选皮革种属特异性的扩增引物，建立了天然皮革的定性PCR 检测方法。 为了进一步规范皮革市场环境，维护消费者利益，促进皮革行业的健康快速 发展，以及为监 检验机构的执法监 提供科学依据和技术支撑，特制订了《天 然皮革定性PCR检测方法》。本标准方法准确、灵敏，重现性、再现性等均符合检 测要求。本标准可为皮革的鉴别与分类提供参考依据，方法可推广应用于多种皮 革的鉴别分类中，具有良好的经济与社会效益，应用前景广阔。 三、标准编制原则和依据 本标准编制遵循 “先进性、实用性、统一性、规范性”的原则，尽可能与国 际通行标准接轨，注重标准的可操作性，严格按照GB/T 1.1-2009