微生物菌种的保藏方法.pdfVIP

第33卷第4期 五 工 Vo1．33NQ4 2010年 4月 Apr． 2010 微生物菌种的保藏方法 付美红，王耀耀，朱研研，郝慧云，刘云清，王亚莉 (华北制药集团新药研发中心，河北 石家庄 050015) [摘 要]菌种的保藏方法有很多，其原理主要是根据微生物的生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧条件，抑制微生物 的代谢作用，使其生命活动降至最低程度或处于休眠状态，使菌株很少发生突变，以达到保持纯种的目的。 [关键词]微生物菌种；保藏方法 [中图分类号]Q93—336 [文献标识码]A [文章编号]1003—5095(2010)04—0033—02 在发酵工业中，具有 良好性状的生产菌种的获得 在无菌条件下，用吸管将石蜡油注入已长好 的斜面试 十分不容易，如何利用优 良的微生物菌种保藏技术， 管中，用量以高出斜面顶端 lcm为宜，使菌种与空气 使菌种经长期保藏后不但存活健在，而且保证高产突 隔绝，然后在棉塞外包上塑料纸或牛皮纸，将试管直 变株不改变表型和基因型，特别是不改变初级代谢产 立置于 0～4℃的冰箱中保藏或低温干燥处保藏。保 物和次级代谢产物生产的高产能力，即很少发生突 藏期间应定期检查，若培养基露出液面，应及时补充 变，这对于菌种极为重要。 无菌石蜡油，使培养基始终处于液面下[2]。 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程 此法实用且效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保 中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的 藏两年以上不死，酵母菌可保藏 l～2年，一般无芽孢 状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持 细菌也可保藏 1年左右，甚至用一般方法很难保藏的 生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能 脑膜炎球菌，在 37℃温箱内亦可保藏 3个月之久 。 力降低的重要因素。所 以，菌种保藏方法虽多，但都是 此法 的优点是制作简单、不需特殊设备，且不需经常 根据这 3个因素设计的。 移种。缺点是保存时必须直立放置，所 占位置较大，同 1 斜面低温保藏法 时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接 将菌种接种在适宜的斜面培养基上，当菌体长满 种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡 斜面后，棉塞部分用油纸包扎好或把试管的棉塞换成 一 起飞溅嘲，应特别注意。 无菌橡皮塞并用蜡烛封好后置于 0～4℃的冰箱中 3 滤纸保藏法 保藏 。但要注意菌种的保藏时间及温度因微生物的种 将滤纸蒯 涤 ，装入安瓿管中，塞 以棉塞，121℃ 类不同而不同，如霉菌、放线菌等保藏 2～4个月需移 灭菌 30min。将需要保存的菌种 ，在适宜的斜面培养 种 1次，细菌最好每月移种 1次。此法为实验室和工 基上培养 ，使其充分生长。灭菌脱脂牛乳 1～2mL滴 厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单、使用方便、 加在灭菌培养皿或试管 内，取数环菌苔在牛乳内混 不需特殊设备，能随时检查所保藏 的菌株是否死亡、 匀，制成浓悬液。用灭菌镊子 自安瓿管取滤纸条浸入 变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，屡次传代会使 菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 微生物的代谢改变，而影响微生物的性状，污染杂菌 将安瓿管放入 内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中， 的机会亦较多It]。