大劣按蚊感染约氏疟原虫defensins基因的克隆及生物信息学分析.pdfVIP

成 都 医 学 院 学 报 94 Journa1ofChengduMedicalCollege doi：lO．3969／j．issn2011．02．001 · 疟疾与媒介生物学研究专题 · 大劣按蚊感染约氏疟原虫 defensins基 因的 克隆及生物信息学分析 张锡林，王英，陈继德 ，宋蓓 (第i军医大学基础部病原生物学教研室 庆，400038) 【摘要】 目的 为探讨大劣按蚊对约氏疟原虫侵入的免疫反应，克隆大劣按蚊的抗菌肽 defensins基闪并对基 因序列进行生物信息学分析。方法 分别提取感染疟原虫的大劣按蚊的蚊 胃总 RNA，根据冈比亚按蚊 defensins 基因设计、合成简并引物，进行 RT-PCR扩增 目的片段，TA克隆后测序并进行序列分析。结果 用简并引物的 RT-PCR扩增出约氏疟原虫感染的大劣按蚊的 189bp目的片段，序列分析表明与冈比亚按蚊 defensins有 87 同 源性，与白蚊伊蚊 defensinsD有88 同源性，为大劣按蚊的defensins基冈。结论 成功克隆并分析了大劣按蚊抗 菌肽 defensins基 ，为进一步的重组表达和研究按蚊抗菌肽的生物活性奠定基础。 【关键词】 大劣按蚊 ；defensins基因；克隆 ；序列分析 【中图分类号】 Q785 【文献标志码】 A 【文章编号】2011)02—0094—05 CloningandSequenceAnalysisoftheDefensinsfrom AnopheledirusinfectedP．yoelii ZHANGxilin，WANG Ying，CHEN Ji—de，SONGBei (Department0厂Pathogenicbiology，TheThirdMilitaryMedicalUniversity， ongqing400038) [Abstract] ObjectiveObjectiveToresearchimmuneresponseofAnopheledirusandclonethedefensinsgenes from AnopheledirusinfectedPlaasmodium yoeliiandconductsequenceanalysis．Methods TotalRNA wereextract from thegutofAn．dirusinfectedP．yoelii，followedbyRT-PCR with lpairsofdegenerateprimerdesignedand synthesizedon thebasisofreporteddefensinsgenesequenceofAn．gambiae．TheproductofPCRwerepurfiedand clonedintoplasmidT veclor．Therecombinantplasmidwassequencedandanalyzed．Result Theamplifiedproducts wereabout189bpfrom An．infectedPlaasmodium yoeliibyRT PCR with degeneracyprimer．．Sequenceanalysis showedithadhomologywith87 comparedwiththedefensinssequencefrom An．gambiaeand88 comparedwith thedefensinsD ofAedesalbopictus．Conclusions ThedefensinsgenesofAn．dirusinfectedP．yoeliihavebeen clonedsuccessfully