抗幽门螺旋杆菌尿素酶B亚单位（UreB）单克隆抗体抗原识别表位的初步鉴定.pdfVIP

维普资讯 ． 184 ． 免 疫 学 杂 志 第 23卷 第2期 2(107年3月 IMMUNOLOGICALJOURNALVo1．23No．2Mar·2OO7 [文章编号]1000-8861(2~7)o2—0184-04 抗幽门螺旋杆菌尿素酶 B亚单位 (UreB)单克隆抗体抗原识别 表位的初步鉴定 李海侠 ，吴亚男，王宪灵，张卫军，罗 平，余 抒，陈洪章，毛旭虎 (第三军医大学医学检验系临床 微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心，重庆 400038) [摘 要] 目的 初步确定抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体(mAb)6E6识别的抗原表位。方法 采用截 短法分段构建含UreB抗原的重组质粒，分别命名为 U12，U13，U15，U16，U47。用 IPrG诱导表达融合蛋白。对表达产物进行 SDS蛋白电泳及Westernblot分析。结果 6E6能够分别识别 1—300位氨基酸的U12片段，1—260位氨基酸的U16片段 ， 1～230位氨基酸的U15片段，而不能识别 1 200位氨基酸的U13片段和251—389位氨基酸的U47片段。结论 mAb6E6抗体 识别的抗原表位位于200—230位氨基酸。 [关键词] 幽门螺杆菌 ；UreB分段抗原分子；单克隆抗体；抗原表位 [中图分类号] R392．12 [文献标识码] A ElementarycharacterizationonepitopeofureaseB subunitofHelicobacterpylod UHal—xia，WUYa-nan，WANGXian-ling，ZHANGWei—jun，LUOPing，YU Shu，CHENHong-zhang，MAOXu—hu (DepartmentofClinicalMcirobiologyandImmunoolyg ，CollegeofMedicalLaboratory，ThirdMilitaryMedcialUniversity， Chongqing400038，Chn／a) [bsb眦t] Objective Todefinitetheepiotpedomainofmonoclonalnata~ty6E6ofureBHelc／obaaerpy／or／．Methods Recombi— rtantplasmidsU12，U13，U15，U16，andU47welcconstructed，nadhtentransformedintoE．co／i．B 1(DE3)forexpressionunder1PrG induction． expressionproteinsWC~eidentifiedbySDSnadWestern blotting．Results 111emonoclonalantibody6E6couldrec natigensofU12(aminoacidsfrom1to300)，U15(aminoacidsfrom1ot23o)，nadU16(aminoacidsfrom1ot260)，butcouldnotrec thenafi~nofU13(aminoacidsfrom1ot20o)orU47(amino acidsfrom251ot389)．Condll~on epiotpeofmonoclonalnaybody6E6 islocatedin20 230aa． 1KeywordsJ Helicobacterpriori；UreBfragmentantigen；Monoclonalnatibody；Epiotpe 幽门螺杆菌 (Helicobacterpyolri，坳 )是 B型 胃 以筛选其有效的抗原表位成分，以此来作为疫苗的 炎、消化性溃疡及 胃粘膜相关淋 巴组织 (MALT)淋 巴 候选抗原，从而产生特异性抗体，大大提高其免疫反 瘤的主要致病因素，并且与胃癌的发生密切相关，在 应性。目前国内外学者已经鉴定出了尿素酶 B亚单 全世界人群中的Hp慢性感染率达 50％以上。免疫 位的几个抗原表位，本室 已经有人通过重组 的尿素 预防与免疫治疗可能是世界范围内有效控制 Hp的 酶B亚单位蛋 白免疫Bal