菌丝霉素的高效表达、分离纯化及活性研究.pdfVIP

菌丝霉素的高效表达、分离纯化及活性研究 梁文 胡又佳 朱宝泉 谢丽萍* 上海医药工业研究院，上海200040 摘要：将来自腐生子囊菌中的菌丝霉素成熟肽基因经大肠杆菌密码子优化后，克隆到pET32a(+)载体中， 构建了含His-tag标鉴和TEV酶识别位点的菌丝霉素表达质粒pYG330，使含菌丝霉素的融合蛋白在大肠杆 菌中以可溶形式高效表达。建立了菌丝霉素的纯化路线，将融合蛋白进行TEV酶切后脱盐再进行亲和层析， 收集目的蛋白冻干浓缩，通过反相高效液相层析(RP-HPLC)进一步纯化获得纯度为72％目的多肽。纯化 所得的菌丝霉素对临床耐药金黄色匍萄球菌M-2、枯草芽孢杆菌有明显的抑菌活性，但对大肠杆菌的抑菌 活性不明显。菌丝霉素对耐药菌抑菌效果好，具有较大的开发价值。 关键词：菌丝霉素；高效表达；分离纯化；抑菌活性；临床耐药菌 Studyonhigh-levelexpression、 purificationandactivityoftheantimicrobialpeptide plect