植物油体表达体系的研究进展Microsoft Word 文档.docVIP

摘要：介绍了植物种子中油体和油体蛋白（oleosin）的结构特征及其编码基因的调控，阐述了用植物油体表达体系这一新型植物生物反应器生产目的蛋白的研究进展和前景。 关键词：油体；油体蛋白；表达体系；植物生物反应器；目的蛋白 现有外源基因表达系统主要包括：细菌、丝状真菌、酵母、哺乳动物细胞、动物乳腺、昆虫（昆虫细胞、昆虫杆状病毒和昆虫整体）和植物表达系统（植物整体、病毒载体和油体）等。这些外源基因表达系统在表达量、表达产物的分离纯化及活性、成本等方面各有优缺点。从近年的研究进展看，利用植物表达系统大规模生产各种目的蛋白还受到诸多因素的限制，表达量低、提取和纯化成本高是主要的限制因素。植物油体表达体系将目的蛋白的编码基因插入油体蛋白（oleosin）编码基因的3`端，以oleosin启动子驱动目的蛋白与oleosin一起在转基因植物的油体中特异表达，获得转基因植物种子后，将种子粉碎， 利用油体的疏水性，离心将油相和水相分开，回收上层油体部分，即可去除种子中大部分的非目标成分，从而显著降低目的蛋白的分离纯化成本，因此近年来倍受关注。作为一种新型的植物生物反应器，为最终利用转基因植物生产外源蛋白提供了新的途径。 1 油体（oil body） 植物种子中贮存的营养物质主要包括蛋白质、脂肪和碳水化合物。其中脂类物质一般以三酰甘油（triacylglycerols,tag）的形式存在，荷荷芭（jojoba）例外，它贮存蜡酯（wax esters）。种子中的tag分子之间不是彼此聚合的，而是分散成许多小的稳定的亚细胞微滴，被称为油体。油体作为生物体中最小的细胞器有其自身的结构和特征。 1.1 油体大小 油体为直径0.5-2.5μm的球体，其大小因植物种类的不同而不同，且受营养和环境的影响。即使同一粒种子，不同组织中的油体大小也不相同。从生物学角度讲，油体的大小主要决定于两个因素：（1）种子发芽时为脂酶催化tag提供最大的作用表面；（2）消耗最少量的油体蛋白和磷脂（phospholipids, pl）。如果油体的直径小于0.2μm，虽可为脂酶的催化提供更大的作用表面，但却需耗费大量pl和oleosin。相反，如果油体直径大于2.5μm，虽节省了pl和oleosin的用量，但由于作用表面过小，在种子发芽及幼苗生长时，脂酶不以迅速水解脂类为植物提供生长所需的能量。 1.2 油体成分 油体的成分包括：（1）92%-98%的中性脂类：主要为tag，约占95%，少量的二酰甘油（dag）和自由脂肪酸；（2）1%-4%的磷脂（pl）：主要为磷脂酰胆碱，约占60%-70%，少量的为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇；（3）1%-4%油体蛋白：其中90%为oleosin，少量的为caleosin、细胞色素c还原酶等。某些植物（如蓖麻和大豆）成熟种子的油体膜上还有脂酶和酰基脂酶存在。花粉粒油体中未检测到oleosin，橄榄和鳄梨果实中皮层油体中也没有oleosin。由于这些油体中的脂类物质不是用于长期贮存，因此murphy和vance提出oleosin可能仅为储藏器官油体所特有，但n?sted等发现根尖油体中有oleosin存在。 1.3 油体的基本结构 根据tzen等提出的油体结构模型，油体内部为液态tag，外部是由单层磷脂分子及其镶嵌蛋白-oleosin组成的半单位膜，这个半单位膜的基本单位是由13个pl分子和1个oleosin分子组成（图1）。pl占油体表面的80%，其余20%是oleosin。每个pl分子的2个疏水酰基朝向内部疏水的tag基质，与tag分子相互作用；pl亲水的头部基团朝向胞浆。oleosin分子中间的疏水区域形成一个约11nm的柄状结构占oleosin分子的2/5，伸入pl的疏水酰基部分及油体内部的tag中，该部分为由68-74个氨基酸组成的发夹结构，发夹结构的顶端是由3个脯氨酸和一个丝氨酸构成的“脯氨酸结”（图1）。oleosin分子其余的3/5部分则覆盖在油体表面，阻止外部的磷脂酶作用于磷脂半单位膜。等电聚焦结果显示，油体的等电点为5.7-6.6，即在ph值为中性时，油体表面带负电荷。植物种子经长期贮存，油体结构仍保持稳定，彼此之间不会相互聚合，普遍认为油体表面电荷和oleosin蛋白的存在是维持油体结构稳定的主要因素。最近的研究结果显示，油体表面除主要镶嵌有oleosin外，还镶嵌少量其它蛋白，如caleosin，因此油体作为植物中最小的细胞器，其结构可能较上述模型更加复杂。oleosin和caleosin是迄今为止研究得较多的两种油体蛋白。 2 油体蛋白 2.1 oelosin及其结构特点 oleosin最早是从芥菜中发现的，目前许多种植物（如芝麻、油菜、向日葵、胡萝卜、玉米、大豆、拟南芥和棉花）的ole