人完整p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员多克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

· 240 · 第22卷 第3期 医学 研 究 生 学 报 Vo1．22 No．3 2009年 3月 JournalofMedicalPostgraduates Mar．2009 · 论 著 · 人完整 p53凋亡刺激蛋 白家族抑制成员 多克隆抗体的制备及鉴定 蔡 云， 高 兴， 辛海明， 陈 杰， 扬 新， 刘泽军 (第三军医大学西南医院国际合作实验室，重庆400038) 摘要： 目的：p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能，其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制 p53诱导 细胞凋亡的能力。为了对 iASPP进行系统研究，文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。 方法：在 完整 iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段，制备了3个多克隆抗体。用 ELISA检测抗体效价，Westernblot比较 3个抗体检测内源性抗原的效果，并用体外转录翻译系统制备的完整 iASPP蛋 白作为对照标准。 结果：1号抗体 效价 1：32000，2号和3号抗体效价 l：16000。Westernblot确定 100000为完整 iASPP蛋 白的条带位置。 结 论 ：成功地制备了iASPP的多克隆抗体，为深人研究完整 iASPP提供了有用的工具。 关键词：p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员； 多克隆抗体； 免疫原； 免疫印迹 中图分类号： R392—33 文献标识码 ：A 文章编号： 10o8—8199(2009)03-0240-04 Preparationandidentificationofpolyclonalantibodyofhumanfull·lengthiASPP CAIYun，GAOXing，XINHai-ming，CHENJie，YANGXin，LIUZe—jun (Laboratory ofInternationalCooperation，SouthwestHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity， Chongqing400038，China) Abstract： Objective：Apoptosisstimulatingproteinofp53 (ASPP)mayregulatetheinhibitoryeffects ontumorinducedbyp53．TheinhibitorymemberofASPPfamily(iASPP)iScapableofspeciallyinhibi． tingp53inducedapoptosis．Inthisstudyapolyclonalanti．iASPPantibodyspecifictowholeiASPPwas preparedtoinvestigatethefunction ofiASPP． M ethods：Wegeneratedantibodiesusingdifferentanti． genscontainedsequencespecifictoN．terminusofiASPP．ValenceofantibodywasdetectedbyELlSA． Western blotswereusedtocomparetheefficiencyofthreeantibodiesinextractsfrom arangeofcelllines derivedfrom differenttissues． Results：TheiASPP invitrotranslatedwasusedasamarkertoconfirm thebandpositionofiASPP inPVDFmembrane． Conclusion：Thisworklaytheofundationforfurther studyonthefunctionofiASPP． Keywords： Inhibitory memberofASPPfamily； Polyclonalantibody； Im