外源性SHIP基因对K562细胞周期及其相关蛋白表达的影响.pdfVIP

肿瘤 2009年3月第 29卷第 3期 TumorVo1．29，No．3，March，2009 ·201· DOI：10．3781／j．issn．1000-7431．2009．03．002 ^峨Is■iR，奄sea 。基础研究麓： 外源性 SHIP基因对 K562细胞周期及其相关蛋 白表达的影响 杨 琳，罗建民，王福旭，刘晓军，温树鹏，成志勇，武学文，杨晓阳 (河北医科大学第二医院血液科，石家庄 050000) [摘要] 目的：探讨 sr尸基因对人白血病细胞系K562细胞周期的调控作用。方 法：用携带野生型SHIP基因及绿色荧光 蛋白 (greenfluorescentprotein，GFP)基因的慢病毒及空载体慢病毒转染人 白血病K562细胞。FCM检测转染效率、细胞凋亡 率及细胞周期变化，实时荧光定量PCR(real-,timefluorescentquantitativePCR，RFQ—PCR)检测SHIPmRNA水平的变化，Western 印迹法检测SHIP、cyclinDI、p21 、p27 蛋 白表达水平的变化。结果 ：与转染空载体组和未转染组相比，转染野生型 5 基因的K562细胞增殖减慢，凋亡率明显上升 (P0．05)；细胞周期显示，G。／G期延长，G期前出现亚二倍体的凋亡峰，s 期和G／M期比例降低；cyclinD1表达降低，p21 和p27 表达增加。结论 ：转染野生型 基因可使细胞周期阻滞 在 G。／G期，抑制 白血病细胞增殖，促进 白血病细胞凋亡。 [关键词] 白血病，实验性；转染；细胞周期；细胞周期蛋 白类；K562细胞 ；基因，SHIP [中图分类号] R733．7；R730．231 [文献标志码] A [文章编号] 1000-,7431(2009)03-201-05 EffectsofexogenousSHIP geneoncellcycleandrelatedproteinexpression ofK562cells YANGLin，LUOJianm·in，WANGFu—xu，LIUXiao-jun，WENShu—peng，CHENGZhi-·yong，WUXue-wen，YANGXiao-Tang (DepartmentofHematology，SecondHospitalofHebeiMedicaiUniversity，Shijiazhuang050000，China) [ABSTRACT] objective：ToinvestigatetheregulatingeffectofSHIPgeneonthecellcycleofhumanleukemiacellhneK562n／ vitro．Methods：TherecombinantplasmidharboringFIV-·SHIPandgreenfluorescentprotein(GFP)weretransfectedintohumanleuke— miaK562cells．TheK562cellstransfectedwithandwithoutemptyvectorwereascontrolgroups．Flow cytometrywasusedtodetectthe transfectionefficiency，apoptotierate，andcellcyclechanges．ThemRNA levelofSHIPweremeasuredbyusingreal-·timefluorescent quantitativePCR(FQ．-PCR)，andtheproteinlevelsofSHIP，eyclinD1，p21 “ ，andp27 weredeterminedbyWesternblotting． Results：Ascomparedwiththatincontrolgroups，thegrowthofK562cellstransfectedwithwildtypeofSHIPgenewassloweddown andtheapoptoticratewassignificantlyincreased(P0．05)．FloweytometryanalysisshowedhtathteK562／SHIPcellswerearrestedin Go／Gl aseanddisplayedsub--diploidapoptosispeak