盐胁迫下西伯利亚蓼茎叶正反消减文库的构建及初步分析.pdfVIP

逢 HEREDITAS(Beijing)2009年4,El ISSN0253-9772 WWW．chinagene．crl 研究报告 DoI：1O．3724，s J．1005．2009．00426 盐胁迫下西伯利亚蓼茎叶正反消减文库的构建及初步 分析 刘关君，刘明坤，许志茹，阎秀峰，魏志刚，杨传平 东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室，哈尔滨 150040 摘要：正向文库 以3％NaHCO3胁迫 48h的材料(茎、叶)为实验方(tester)，以未胁迫的材料(茎、叶)为消减方 (driver)；在负向文库中，以未胁迫的材料(茎、叶)为实验方(tester)，以3％NaHCO3胁迫 48h的材料(茎、叶)为 消减方(driver)，利用抑制性消减杂交技术(suppressionsubtractivehybridization，SSH)构建 了3％NaHCO3胁迫下 西伯利亚蓼茎叶正反消减文库。从文库中共获得 2282条有效EST序列，其中从茎正向消减文库 中获得598条， 从茎负向消减文库 中获得490条，从叶正向消减文库中获得627条，从叶负向消减文库 中获得567条 经BlastX 序列比对后，通过MIPs方法对 EST功能进行分类并对茎叶正反消减文库做 了比较，其中茎与叶部除细胞救援 与防御、转运组件 中变化趋势相同外，在代谢、能量、光合作用、蛋白合成、转录和信号传导等方面均表现为 相反趋势，另外通过荧光定量 RT-PCR对 12个潜在与盐胁迫相关基因进行定量分析，结果显示 12个基因在未 经胁迫与盐胁迫处理后的西伯利亚蓼叶与茎部有着很大差异，说明叶与茎部在NaHCO。条件下可能具有不同应 答机制与分工，这有助于进一步理解西伯利亚蓼分子耐盐机制。 关键词：西伯利亚蓼；消减文库；盐胁迫；差异表达基因 J · · ‘ 1 ’ ■ ● 00 1 1 1 』 ● 0nstructioU and analysisOIa I-orWard and reVerseSUbtraCnVe cDNA library from leaves and stem 0fPolygonum sibiricum Laxm ．undersaltstress LIU Guan—Jun，LIU Ming—Kun，XU Zhi—Ru，YAN Xiu—Feng，WEIZhi—Gang，YANG Chuan-Ping TheLaboratoryoJ’ForestGeneticsandBreedingandBiotechnologyofMinistryofEducation，NortheastForestryUniversity，Harbin 150040，China Abstract：UsingcDNAspreparedfrom theleavesandstemsofPolygonum sibiricumLaxm．treatedwithNaHCO1stress for48hastestersandcDNAsrfom unstressed sibiricum leavesna dstemsasdrivers1ibrary,suppressionsubtractivehy． bridization(ssi-i)wasemployedtoconstructacDNA subtractedlibrary，whichcontained2282validsequencesincluding 598ESTsinthestemsforwardSSH libraryand490ESTsinhtestem reverseSSH library,627ESTsintheleafofrwrad SSH libraryand567inhteleafreverseSSH library．AccordingtohtefunctionalcatalogueofMIPsandthecomparisonof htereverseandforwradSSH librariesofthestem and1eaf,theresponsestoNaHC0 srtessweredifferentbetweenleafand stem ，exceptofrhtesametrendincellrescuedefensenadrtansportfacilitation．Thertendinthem