鼠巨噬细胞Ana-1培养弓形虫RH株速殖子的特性研究.pdfVIP

中国兽医科学 2009，39(03)：l96—203 ChineseVeterinaryScience 中图分类号 ：S852．723 文献标志码 ：A 文章编号 ：1673—4696(2009)03—0196—08 鼠巨噬细胞 Ana一1培养 弓形虫 RH株 速殖子的特性研究 郝永新，李雪莲，刘 群 ，丁 隽，张 维 (中国农业大学 动物医学院，北京 100193) 摘要 ：为比较 鼠巨噬细胞 Ana一1(吞噬细胞)和 Vero细胞 (非吞噬细胞)培养 弓形虫RH株后 虫体以及 虫体和宿主细胞间的表现 ，采用一般形态学观察、流式细胞术检测 弓形虫接种后 Ana一1细胞和Vero细胞的 凋亡和坏死情况 ，并用NO检测试剂盒检测Ana1细胞的NO分泌量。结果显示，弓形虫能够在两种细胞上 大量发育和繁殖，而且两种细胞 凋亡和 坏死并存，Ana一1细胞 以坏 死为主 (坏死率 为 58．6 ，凋亡率为 12．6V0)，Vero细胞则以凋亡为主 (坏死率为 28．7％，凋亡率为 56．0 )。对 NO的检测显示，含 100mI／I 小牛血清培养的Ana1N()分泌浓度为0．16～0．17txmol／mI；而感染弓形虫速殖子的Ana一1NO分泌浓度 为0．18～0．46“mol／mI，两者差异显著(P0．05)。证实，应用Ana一1和 Vero细胞培养 弓形虫均可获得大 量虫体；弓形虫感染后吞噬细胞和非吞噬细胞的凋亡率和坏死率不同，差异极显著 (P％0．01)；弓形虫感染 能够诱导Ana1分泌 N()。 关键词：弓形虫；Anal细胞 ；流式细胞术；细胞凋亡；坏死 Characteristics0fcultivationofToxoplasmagondiiRH strain tachyzoitesin murineAna一1macrophages HA()Yong—xin，LIXue—lian，IIU Qun。DING Jun，ZHANG Wei (CollegeofgeterinaryMedicine，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing100193，China) Abstract：In orderto compare the characteristicsofcultivation ofTo．roplasma gondiiRH strain tachyzoitesinmurineAna一1macrophages (phagocyticcells)tothoseinVerocells(non—phagocyticcells)， theapoptosisandnecrosisoftheAna一1cellsandVerocellsinducedbyT．gondiiweredeterminedbymor— phologicalobservation andthefluorescenceactivatedcellsorting(FACS)assay，andNO secretionofthe Ana一1cellswasdeterminedbytheNO molecularkit．TheFACSdatashowedthatthenecrosisrateandaD— optosisrateintheAna一1cellswere58．6％ and12．6 ，respectively，andthenecrosisrateandapoptosis rateintheVerocellswere28．7 and56．0 ，respectively．ThesecretionsofN()oftheAna一1cellswere 0．18—0．46,／mol／mIand0．16—0．17／,mol／mI inducedbycalfserum andT．gondii(P0．05)，respec tively．Theseresultsindicatedthatlargequantitiesof gondiicouldbeobtainedbycultivatinginmurineAnal macrophagesandVerocells．Differentproportionsofapoptosisandnecrosiswereobservedinthephagocyt