双向氢化酶基因的克隆、分析及其在节旋藻和螺旋藻分子系统学中的应用.pdfVIP

双向氢化酶基因的克隆、分析及其在节旋藻和螺旋议分子系统学中的应用 双向氢化酶基因的克隆、分析及在节旋藻和螺旋藻 分子系统学研究中的应用 摘 要 根据GenBank中报道的蓝藻双向氢化酶基因序列设计引物，用PCR和染 色体步移法得到了节旋藻双向氢化酶的基因全序列。包括心肌黄酶部分 (由 hoxEFU编码)和[NiFe]氢化酶部分 (由hoxYH编码)共5个亚基及上游349bp 的序列。其中在基因内部发现了一个推测的开放阅读框。双向氢化酶操纵子全 序列长度为7081bp，其中包括hoxE基因上游349bp，hoxE540印，hoxF 1596bp,hoxF和hoxU基因间ORF1650bp,hoxU732bp,hoxY549bp,hoxH 1431by以及各基因之间的间隔区。分别对这些亚基进行了核酸序列、氨基酸 分析，及二级结构和三维结构的预测。 在得到双向氢化酶基因群中发现两段具有启动子功能的序列，分别位于 hoxE基因的上游，hoxF和hoxU基因的间隔区。将推测的启动子序列和启动子 探测载体pEGFP-1进行重组，用热激转化法和自然转化法分别对大肠杆菌 JM109和集胞藻Synechoc