原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
2011;31(6) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·955 ·
·技术方法·
用于时间分辨荧光免疫分析的结核分枝杆菌培养滤液蛋白10参
照品的制备
1 2 1 1 1 2 2
郭芳芳 ，邹立林 ，吴英松 ，胡志明 ，李金龙 ，吕建新 ，高基民
1 2
南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所，广东 广州 510515 ；温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室/
浙江省模式生物技术与应用重点实验室，浙江 温州 325035
摘要：目的 通过基因工程技术制备结核分枝杆菌培养滤液蛋白10（CFP10）、链亲和素（SA）/CFP 10融合蛋白（包括
SA-CFP10、CFP10-SA) ，筛选灵敏度最高、稳定性最好者作为时间分辨荧光免疫分析法检测（TRFIA）的参考标准品。方
法以结核分枝杆菌H37Rv 标准株基因组为模板，扩增CFP10基因，将其克隆到pET24b、pET24b-SA、pET21a-SA 三种载
体中，转化到大肠杆菌Rosetta 中进行表达，表达产物经镍离子亲和层析（Ni-NTA ）柱纯化，透析法复性。三种重组蛋白用
双抗体夹心法TRFIA 从灵敏度、稳定性两方面进行评价。结果成功构建了pET24b-CFP 10、pET24b-SA-CFP 10 和
pET21a-CFP10-SA 三种表达载体，重组蛋白CFP10主要为可溶形式表达，融合蛋白CFP10-SA、SA-CFP10均以包涵体形
式存在，Ni-NTA 柱纯化后透析复性，纯度均可达90%以上。三种重组蛋白经双抗体夹心TRFIA ，CFP10-SA 灵敏度最高
（0.02 μg/L），稳定性最好。结论 得到了灵敏度高、稳定性好的TRFIA 检测CFP10 的参照品CFP10-SA 融合蛋白，为研制
该结核分支杆菌时间分辨荧光诊断试剂盒，并应用于临床打下了基础。
关键词：结核分枝杆菌；培养滤液蛋白10；时间分辨荧光分析法
中图分类号：R318.13 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2011）06-0955-05
Preparation and characterization of reference samples of Mycobacterium tuberculosis
culture filtrate protein-10 for time-resolved fluoroimmunoassay
1 2 1 1 1 2 2
GUO Fang-fang , ZOU Li-lin , WU Ying-song , HU Zhi-ming , LI Jin-long , LÜJian-xin , GAO Ji-min
1School of Biotechnology, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2Zhejiang Provincial Key Lab of Medical Genetics,
Wenzhou Medical College, Wenzhou 325035, China
Abstract: Objective To prepare reference samples of Mycobacterium tuberculosis culture filtrate
文档评论（0）