植物螯合肽合酶基因AtPCS2的表达调控.pdfVIP

中国科学: 生命科学 2013 年 第43 卷 第12 期: 1112 ~ 1118 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 中国知名大学及研究院所专栏 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所专辑 植物螯合肽合酶基因AtPCS2 的表达调控 丁戈, 彭佳师, 张国斌, 易红英, 付艳蕾, 龚继明* 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所, 植物分子遗传国家重点实验室, 上海 200032 * 联系人, E-mail: jmgong@ 收稿日期: 2013-09-19; 接受日期: 2013-10-21 国家自然科学基金创新研究群体科学基金(批准号:资助项目 doi: 10.1360/052013-309 摘要 植物螯合肽合酶(PCS)受重金属离子激活, 并以还原型谷胱甘肽为底物合成植物螯合肽 关键词 (PCs), 在植物和真菌的重金属解毒机制中起重要作用. 拟南芥基因组中有两个编码 PCS 的基因 cad1-3 AtPCS2 AtPCS1 和AtPCS2 , 但AtPCS1 单基因功能缺失即可导致相应的突变体cad1-3 对镉高度敏感, 其体 镉 内也检测不到PCs; 而体外表达分析表明, AtPCS2 具有完全的PCs 合酶活性, 预示植物体内可能存 在AtPCS2 的负向调控机制. 基于该推测, 构建了 CaMV 35S 启动子驱动的AtPCS2 基因编码区与 c-Myc 抗原标签融合的过表达载体. 结果表明, 在cad1-3 的CaMV 35S/AtPCS2:cMyc 的异位表达株 系中, AtPCS2 的mRNA 和蛋白都保持较高的表达量. 不仅如此, AtPCS2 具有植物螯合肽合成能力, 并完全互补了cad1-3 突变体的镉敏感性状. AtPCS2 和EYFP 的融合蛋白在细胞质有明显表达, 在 细胞核也检测到一定信号. 以上结果表明, AtPCS2 在植物体内可能主要受转录水平调控, 而且可能 具有调节PCs 合成以外的其他生化功能. 在植物和真菌的重金属解毒机制中, 植物螯合 低细胞质中游离重金属离子的浓度, 进而减轻对细 肽(phytochelatins, PCs)起重要作用. 植物螯合肽合酶 胞的毒害. (phytochelatin synthase, PCS)受重金属离子, 如Cd2+, 拟南芥(Arabidopsis thaliana ) 具有 AtPCS1 和 Cu2+, Zn2+, Pb2+ 以及类金属As5+等激活, 以还原型谷 AtPCS2 两个高度同源的植物螯合肽合酶基因, 在植 胱甘肽(glutathione, GSH)为底物合成PCs[1,2]. PCs 的 物体内能同时检测到其 mRNA, 但是否都具有功能 一般结构式是(γ-Glu-Cys)n-Gly, 其中n= 2~11[2~4]. 研 一直未有定论, 因为在AtPCS1 基因的功能缺失突变 究表明, PCs 形成后, 通过其分子中半胱氨酸的巯基 体 cad1-3 中, AtPCS2 仍然表达, 但是已检测不到 与 Cd2+等迅速螯合生成低分子量复合物 LMWC(low PCs[7,8], 预示AtPCS2 可能不具有调控PCs 合成的活 molecular weight complex)[5,6], 然后低分子量复合物 性.