[新技术]组织特异的miRNA海绵-AcumeneX3在肿瘤学研究中.pdfVIP

Acumen eX3 在肿瘤学研究中的应用 1. 简介 根据卫生部2008 年发布的调查报告，恶性肿瘤已成为我国城市的首位死因，且我国恶性肿瘤死亡 率属于世界较高水平。如何擒拿这个“头号杀手”？这给肿瘤学的研究人员布置了一道难题。好在，我们 有很多工具可以利用，比如近来渐趋流行的高内涵分析。肿瘤学研究很容易采用高内涵分析，因为它与 多个高内涵的应用直接相关。例如，任一种癌症治疗的主要目标都是杀死癌细胞，那么也就离不开细胞 毒性、细胞增殖与凋亡等分析。传统的分析工具包括流式细胞仪和显微镜成像系统，然而，激光扫描微 孔板细胞仪却有着更多的优势。 就拿肿瘤学中常见的细胞周期分析来举个例 缺少了某些对整个细胞功能很关键的成分，比如支 子。TTP LabTech 公司出品的Acumen eX3 高通 架蛋白（scaffold protein ）。 量化高内涵筛选平台有着流式细胞仪无法比拟的 研究显示，支架蛋白将激酶通路中各个组分拉 通量。整个384 孔板的读取只需要10 分钟，这其 到一块，从而实现了特异的细胞内相互作用。（如 中还包括了多重分析，比如有丝分裂指数的确定。 图2.1 ）。JIP-1 （JNK 相互作用蛋白-1 ）就是这样 流式细胞仪只能分析细胞悬液，而 Acumen eX3 一种哺乳动物的支架蛋白，它是 MLK、MKK7 和 则能够在原位分析贴壁细胞，保留了细胞在处理过 JNK 特异的，能促进这些酶的活化。在全细胞的环 程中所发生的形态变化。光这两点就已经很有吸引 境中，通路激活所需的所有成分都是以天然的数量 力了，当然，Acumen 的应用也不仅是细胞周期分 存在，自然也就排除了理论配比失衡。利用全细胞 析，还包括肿瘤学研究中的多个应用，如蛋白激酶 分析，就有可能鉴定出在接头蛋白位点起作用的化 图谱分析、细胞增殖、克隆形成、细胞毒性、凋亡、 合物，从而有助于新药的开发。 细胞粘附、血管生成等等。本文就详细描述了 Acumen 在几个关键领域的应用。 2. 蛋白激酶图谱分析 蛋白激酶在许多信号通路如增殖、分化和凋亡 中起了重要的调节作用。目前已鉴定的人类激酶有 518 种，这表示我们有很大的机会去发现新的激酶 通路。过去，研究激酶通路常采用体外分析法，也 图2.1 JIP-1 充当支架蛋白，将MLK、MKK7 就是利用放射性标记的ATP 来检测结合事件。这 和JNK 拉到一起。 些方法非常灵敏，但局限于通量低，且使用不讨人 A ．接头蛋白未受刺激，激酶就不能停靠，因 喜欢的同位素。另一个问题就是蛋白从体内分离出 此不足以局部化形成激酶级联。 来后，它起作用的方式可能会改变。反应中可能会 2009年12月25日第七十一期 第 20 页，共 40 页 下一页 返回 B．一旦支架蛋白激活，就发生构象改变，允 许激酶级联的组分结合到接头蛋白上，让它们足够 接近并激活。 在大多数化合物都被排除之后，基于细胞的高 内涵分析广泛应用于第二轮的激酶活性图谱分析。 由于现有技术的低通量，它们在高通量筛选中的应 用面临巨大的挑战。对于高内涵激酶分析而言，也 有一个额外的难题，那就是免疫检测所需的固定步 骤有很多步，非常耗时。