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⒈要使目的基因与对应的载体重组,所需的两种酶是( ) ①限制酶 ②连接酶 ③解旋酶 ④还原酶 A.①② B.③④ C.①④ D.②③ ⒉实施基因工程的第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来,这要利用限制性内切酶。一种限制性内切酶能识别DNA分子的GAATTC顺序,切点在G和A之间,这是利用了酶的( ) A.高效性 B.专一性 C.多样性 D.催化活性易受外界影响 A B C C 画概念图----基因工程操作的常规方法流程图 用限制性内切酶切割DNA 用DNA连接酶连接目的基因与运载体 用特殊的运载体将DNA分子导入受体细胞 获得转基因生物 目的基因的检测 导入 扩增 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 能发荧光的热带斑马鱼 普通热带斑马鱼是不发荧光的 如何让普通热带斑马鱼也发荧光? 转基因生物与转基因食品 基因工程:又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说,就是按照人们的意愿,把一种生物的某种基因提取出来,加以修饰改造,然后放到另一种生物的细胞里,定向地改造生物的遗传性状。 原理:基因重组 操作水平:DNA分子水平 结 果:定向地改造生物的遗传性状,获得人类所需要的品种。 目的基因的获得 如何将目的基因导入受体细胞 目的基因的表达 第一步:获取目的基因: 三、基因工程基本步骤 1、人工合成基因 2、从某生物体细胞内的DNA中直接分离基因 一、 获取目的基因 1.基因的“剪刀”──限制性内切酶(限制酶) 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切割点上将DNA分子切断。 专一性(eg:EcoRI限制酶) GAGACTGATTGGCCTTAAGCTCGAG CTCTGACTAACCGGAATTCGAGCTC GAGACTGATTGGCCTTAA CTCTGACTAACCGG GCTCGAG AATTCGAGCTC 除了某些病毒以外,限制性内切酶只在原核生物中发现 识别位点和切割位点 GATCC G G CCTA GGA CCT TCC AGG 黏性末端 平末端 DNA 分子大、难扩散、难以通过细胞膜运输 “特洛伊木马”的启发 “木马”:能比较容易穿过细胞膜进入细胞; 能携带目的基因 有助于目的基因在细胞内的表达 常用的运载体:质粒、噬菌体和动植物病毒 3、基因的运输工具——运载体 标记基因,便于进行检测。 运载体必须同时满足三个要求:①能与目的基因结合;②能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达;③比较容易得到。 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口,将目的基因插入切口处,让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后,在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 第二步、目的基因与运载体结合 被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端? G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 目的基因 质粒 基因的针线──DNA连接酶 连接酶的作用是:将互补配对的两个黏性末端连接起来,使之成为一个完整的DNA分子。 重播 导入 扩增 第三步:将目的基因导入受体细胞 导入 扩增 常用的受体细胞:菌类和动植物细胞 Eg:可以分泌人胰岛素 的细菌 第四步、目的基因的表达和检测 大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少,必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落,检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落,保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 基因工程的概念 基因工程的基本步骤(四步骤) 目的基因的运载体有哪些? 质粒(存在于细菌和酵母菌中)、噬菌体、 动植物病毒 基因的剪刀、针线分别是? 限制性核酸内切酶(200多种)、DNA连接酶 一、基因工程与作物育种 抗虫害的玉米 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 获
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