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本科生毕业设计（论文）
( 2009届 )
题 目：红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离
学 院： 化学与生命科学学院
专 业： 生物科学
学生姓名： 付文佳 学号：
指导教师： 杨 莉 职称： 副 教 授
合作导师： 职称：
完成时间： 2009 年 5 月 20 日
成 绩：
正文： 红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离
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HYPERLINK \l _第_一_部 浙江师范大学本科毕业设计(论文)正文
目 录
摘要 1
英文摘要 1
1 引言 1
2 材料 2
2.1 植物材料 2
2.2 实验试剂 2
2.3 主要仪器和设备 2
3 方法 3
3.1 总RNA提取 3
3.1.1 常用试剂配制 3
3.1.2 器具处理与准备 3
3.1.3 提取RNA 3
3.2 RNA的纯化 4
3.3 RNA提取质量与含量检测 4
3.3.1 总RNA的电泳分析 4
3.3.2 总RNA含量与纯度测定 4
3.4 cDNA链合成 5
3.4.1 cDNA一链的合成 5
3.4.2 cDNA第二链合成 5
3.5 基因的克隆及序列分析 6
3.5.1 基因的克隆 6
3.5.2 割胶回收 6
3.5.3 T-载体连接 6
4 结果与分析 7
4.1 RNA电泳结果分析 7
4.2 RNA紫外分光光度计测定结果分析 7
4.3 纯化后RNA电泳结果分析 8
4.4 合成cDNA电泳结果分析 8
4.5 PSY基因的克隆 9
4.6 序列性分析 9
5 讨论 12
参考文献 14
致谢词 16
红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离
化学与生命科学学院 生物科学专业 付文佳
指导老师：杨莉（副教授）
摘要：采用改良Bugos法提取红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚成熟果实果肉RNA，逆转录合成cDNA。根据NCBI网站公布的PSY基因全序列设计引物，采用高保真Taq聚合酶进行PCR扩增，将扩增产物连接到pUCm-T载体，转化至大肠杆菌DH5α，并送公司测序。比较发现，红肉蜜柚和琯溪蜜柚果肉PSY基因全长均为1317 bp，编码439个氨基酸，序列比对结果显示两者PSY基因与柑桔属PSY基因同源性都相对较高，同源性最高达99 %。
关键词：红肉蜜柚；琯溪蜜柚；PSY基因；基因分离；序列分析
Isolating PSY Gene from Red-fleshed Sweet Pomelo and Its Parent Guanxi Sweet Pummelo
FU Wen-jia Director: YANG Li
(College of Chemistry and Life Science, Zhejiang Normal University, 052
Abstract：The total RNA was extracted from the ripe fruit of Red-fleshed sweet pomelo and Guanxi sweet pomelo using improved Bugos RNA extraction method, then were synthesised cDNA by reverse transcriptase kit. At the same time, we designed primers for PSY gene sequences according to the information PSY gene sequences on NCBI, high-fidelity Taq polymerase were used for PCR amplification and cDNA as the template. Finally, the PCR products were connected to pUCm-T vector, then sequenced and analyzed the seq
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