菠菜色素的提取和色素分离研究分析论文.docVIP

·60·  菠菜色素的提取和色素分离 Extraction and Seperation of Spinach Pigments  科技论坛 聂瑜奕 李贵军 汪 帆 （曲靖师范学院化学化工学院，云南 曲靖 655011） 摘 要：采用浸泡法、超声波法及微波辅助法提取菠菜中的色素，利用薄层色谱（TLC）和柱色谱相结合的方法对色素进行分离纯化， 并用紫外—可见光谱对分离的色带成分进了鉴定。 关键词：菠菜色素；紫外—可见光谱；分析 Abstract：Spinach pigments were extracted by immersion，ultrasonic wave and microwave radiation. Pigments were also sperated by TLC and column chromatography. In addition，Pigments were determined by ultraviolet-visible spectrum. Key words：spinach pigments；ultraviolet-visible spectrum；analysis 菠菜中含有胡萝卜素、叶黄素和叶绿素等色素。叶绿素是植物 进行光合作用所必需的催化剂，主要以叶绿素 a 和叶绿素 b 两种形 式存在。胡萝卜素具有三种异构体，其中 β- 胡萝卜素除具有维生 素 A 的生理活性，作为维生素 A 使用外，还能清除体内自由基，提 高人体免疫力，延缓细胞和机体衰老[1]。叶黄素是一种类胡萝卜素， 是天然的食品色素和食品营养剂，具有明显的抗氧化、抗衰老和抗 突变等生物活性[2]。本文采用多种提取方法对菠菜色素进行提取，利 用薄层色谱（TLC）和柱色谱相结合的方法对色素进行分离纯化。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 TU-1810P 紫外分光光度计（北京普析通用）；旋转蒸发仪（东京 理化）；层析柱（30×2cm）；常规玻璃仪器；市售菠菜（洗净阴干，去除 叶柄）；叶黄素标准品购自 Adrich-Sigma 公司；乙醇（95%）、石油醚 （60~90℃）及乙酸乙酯（国产工业品重蒸后使用），其余试剂均为国 产化学试剂（所有试剂均未经纯化直接使用）；TLC 使用 GF254 高效 荧光硅胶板，柱层析使用 200~300 目柱层析硅胶（均为青岛海洋化 480nm，451nm； 叶黄素的紫外光谱测定：用石油醚稀释所得第二个色带，加到 1cm 的 比 色 皿 中 ， 以 石 油 醚 作 空 白 试 剂 ， 测 得 Kmax 为 448nm，424nm； 叶绿素的紫外光谱测定：用石油醚稀释所得第三个色带，加到 1cm 的 比 色 皿 中 ， 以 石 油 醚 作 空 白 试 剂 ， 测 得 Kmax 为 665nm，429nm。 2 结果与讨论 在三种菠菜色素提取方法中，浸泡法属于比较经典的方法，操 作简便易行，提取率较高；超声波法相对复杂，提取时间较长；微波 法简单高效，大大节约提取时间，但对于工业化提取不太适用。 薄层色谱分离菠菜色素时，各色素在不同展开剂条件下的 Rf 值如表 1 所示。 表 1 菠菜色素的 Rf 值 工厂生产） 1.2 提取与分离 1.2.1 浸泡法提取菠菜色素。 在研钵中放入 20g 处理过的菠菜叶，再取 30ml 3:2（体积比）石 油醚—乙醇混合液，加入到装有菠菜叶的研钵中适当研磨，将提取      液转移到分液漏斗中，反复三次，合并提取液，依次用饱和氯化钠溶 液（15ml×1），蒸馏水（15ml×2）对有机相进行洗涤，有机层用无水  !      # 硫酸钠干燥后转移到圆底烧瓶，用旋转蒸发仪浓缩至约 1ml。 1.2.2 超声波提取菠菜色素。 采用翟虎[3]等人研究的菠菜色素超声波提取条件：乙醇为提取 剂，料液比 1:5，提取温度 50℃，处理时间 60min，超声功率 200W，对 20g 处理过的菠菜叶进行色素提取。 1.2.3 微波辅助提取菠菜色素[4]。 在 100ml 锥形瓶中加入 20g 处理过的菠菜叶，再加入 30ml 95% 乙醇溶剂，在中功率（600W）条件下微波提取 1min，甘蔗糖厂 滤泥中叶绿素微波辅助提取工艺优化）提取液转移之后，在同样条 件下再提取两次，合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩至约 1ml。 1.2.4 薄层色谱分离菠菜色素。 将 GF254 高效荧光硅胶板用玻璃刀划成 4×2cm 大小，毛细管 点样之后用石油醚—丙酮、石油醚—乙酸乙酯两个溶剂体系