GgamiR92对靶基因ATRX的调控研究分析论文.docVIP

中国科技论文在线   Gga-miR-92 对靶基因 ATRX 的调控分析# 王晓，苗楠，龚萍，龚炎长，俸艳萍** （华中农业大学农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070） 5 10 15 20 25 30 35 40 摘要：为研究 gga-miR-92 在鸡性腺发育中的调控作用，本研究首先通过生物信息学预测与 性腺发育相关的靶基因，然后采用双荧光素酶报告基因法在鸡 DF-1 细胞中验证 miR-92 对靶 基因的调控关系。结果表明，TargetScan 和 miRDB 两个软件预测到 ATRX 是 gga-miR-92 的 靶基因，成功克隆并构建了 ATRX 3’-UTR 的表达质粒，双荧光素酶报告基因分析表明 miR-92 能显著抑制融合 ATRX 3’UTR 的报告基因的荧光表达量(P0.01)。本研究结果证明了 ATRX 与 gga-miR-92 存在着负向调控关系。 关键词：鸡；miR-92；ATRTX；性腺发育 中图分类号：S831.2 The regulation effects of gga-miR-92 on the target gene ATRX Wang Xiao, Miao Nan, Gong Ping, Gong Yanzhang, Feng Yanping (Key Laboratory of Agricultural Animal Genetics, Breeding and Reproduction, Ministry of Education, Huazhong Agricultural University, WuHan 430070) Abstract: To study the regulation effect of miR-92 on chicken gonadal development, targets related to goand development were first predicted by using bioinformatics methods, then the regulated relation of miR-92 with target was identified by dual luciferase reporter assay in chicken DF1 cell. Results showed that ATRX was predicted to be a target of gga-miR-92, recombined expression vector of ATRX 3’UTR were constructed successfully. Dual-liciferase reporter assay showed that miR-92 decreased the activity of luciferase co-trasfected with ATRX vector. It can be conclused that ATRX might be negatively regulated by gga-miR-92. Keywords: chicken; miR-92; ATRX; gonad development 0 引言 MicroRNA（miRNA）是一类生物体内长约 20~24nt 的单链非编码小分子 RNA，研究表 明它在细胞增殖、分化及凋亡、胚胎形成、组织器官发育、肿瘤转移等多个生物学途径中起 着重要的调控作用。miRNA 主要通过两种沉默机制指导 RISC 下调目的基因的表达：mRNA 的切割或翻译抑制。并且 miRNA 与靶基因 3′UTR 之间的配对程度决定了其作用的方式，其 发挥功能的关键区域是 5’端的种子序列（miRNA 5’端的 2-8 或 2-7 个核苷酸）。如果 miRNA 与靶基因 3′UTR 之间完全互补，miRNA 就指导 mRNA 特异性切割，如果两者不是完全互补 的，那么 miRNA 就指导翻译抑制。而动物体内的 miRNA 与靶基因的 3′UTR 序列不完全配 对,主要介导靶基因 mRNA 的翻译抑制[1]。因而在对 miRNA 靶基因进行生物学预测和鉴定 时，主要还是考虑 miRNA 与靶基因 3′UTR 之间的作用规律。 本课题组在前期研究中发现在鸡早期胚胎中存在较多雌、雄差异表达的 miRNA，表明 在动物性腺早期分化及发育中 miRNA 可能起到了一定的作用。其中表达谱结果表明 gga-miR-92 在性分化早期雄性性腺中的表达显著高于雌性，故推测它可能参与了鸡胚雄性 性腺发育的过程。miR-92 属于 miR-17-92 基因簇，很多文献报道了该基因簇