生物降解聚电解质的合成及其对蛋白质纳米聚集体包封研究.pdf

中文摘要 中文摘要 越来越多的多肤、蛋白质与酶 (统称为蛋白质)药物用于临床。采用生物 可降解高分子制备蛋白质控释制剂，可以延长蛋白质的半衰期，改变给药途径， 减少副作用。提高载药量是蛋白质纳米制剂具备实用前景的关键。采用生物可 降解聚电解质包封蛋白质的纳米聚集体，有望使这一问题得以解决。 聚a(，p一L-苹果酸)a(，p一PMA)是一种生物可降解聚电解质，通过L一苹果 酸的熔融缩聚法制备，其结构和性能采用凝胶渗透色谱法 (GPC)、核磁共振法 (N加IR)、红外光谱 I(R)、拉曼光谱 (几助即)、X-射线粉末衍射法 (XRD)、 热重法 (TG)以及差示扫描量热法 (DSC)等测试手段进行表征。a，卜PMA存 在支化结构，主链由a一与p一苹果酸残基以相近比例随机连接而成，端基主要为 苹果酸残基，存在少量的富马酸残基。本文详细研究了反应时间对a，pP·MA分 子量和化学结构的影响。通过优化反应条件，制得数均分子量达到4500/gmol、 支化度约为1400、端轻基含量约为80%的非晶态a，p一PMA。在研究a，p一MA性 能的过程中，发现氏p一PMA在水中以新的机理发射荧光，它的最大激发波长为 430口口，最大发射波长为420功口。本文详细研究了分子量、浓度与HP对氏p.PMA 荧光强度的影响，并探究了其荧光产生机理。 Q，卜PMA的衍生物采用化学修饰法制备，以降低氏p一PMA的水溶性。以碘 甲烷为甲基化试剂制备甲基化Q，卜PMA(EPMA);以丙胺为胺化试剂制备酞胺 化a，卜PMA(APMA)。它们的结构与性能采用PGc、HINMR、RI、TG 以及 DSC等测试手段进行研究。通过改变修饰试剂与高分子结构单元的摩尔比，获 得不同修饰程度的PEMA或AMPA，产物的水溶性明显降低。 水溶性壳聚糖 (WSC)也是一种生物可降解聚电解质，采用HZOZ异相降 解法制备，其结构和性能采用粘度法、PGc、IHNMR、XRD等方法进行表征. 本文主要考察了反应温度、反应时间、以及玩伍与壳聚糖中糖单元摩尔比对 wsC分子量和产率的影响，并获得分子量为89)0(/gmul的非晶态wsC. 胰岛素纳米聚集体通过盐析法获得。通过调节溶液的四和NaCI浓度，并 经过适当的低温超声波处理，目前已经得到粒径为100一230刊旧的不规则椭球 形纳米聚集体。聚集体中胰岛素主要是无定形的，其分子构象没有明显变化。 中文摘要 采用a，p.PMA和wsc在胰岛素纳米聚集体上交替吸附，以制备胰岛素- 聚电解质纳米粒子.这些粒子的性质在扫描电镜 (sEM)、激光粒度分析仪、屯 电位仪等仪器上测定。目前已经获得聚电解质多层膜最多为8层的胰岛素一聚电 解质纳米粒子，载药量约为53%，低温超声波分散后，粒径在100~250.m之 间。本文研究了培养液pH以及聚电解质层数对a，p一PM习WSC多层膜渗透性的 影响，并考察了胰岛素的释放动力学以及释放形式.在pH74.的BPS溶液中， 胰岛素一聚电解质纳米粒子存在初始突释现象，但是多层膜对胰岛素确实具有一 定的缓释效果。这一效果随着吸附层数的增加而增强，这主要是由于多层膜位 阻的增加与溶胀的减小。胰岛素以自由分子的形式从这些纳米粒子中释放。 对于不易通过盐析法沉淀的超氧化物歧化酶(SOD)，其纳米聚集体通过聚 合物沉淀法获得.SOD与透明质酸(AH)在一定pH的盐溶液中结合，.从而形 成SOD一HA聚集体。本文采用准弹性光散射法与浊度滴定法研究了SOD与HA 的结合过程，并采用电位滴定法和浊度滴定法详细考察了这一过程中二者之间 静电相互作用的变化。随着pH的降低，SODl·lA混合液经历无相互作用、可 溶性复合体、聚集体及其熏新溶解四个阶段。静电相互作用是推动soD与AH 结合的主要因素。二者发生静电结合的必要条件是SOD结合H+的增加量小于 HA结合H+的减少量.本文还考察了溶液的HP、Nacl浓度、s0D浓度和HA 浓度对SOD回收率的影响，并确定了制备SOD.HA聚集体的最优条件。目前， 已经获得粒径为200~400刊叮的不规则SOD一HA纳米聚集体。 采用ENF[A和WSC在这些纳米聚集体上交替吸附，以制备SOD一HA.聚电 解质 (sHI，)纳米粒子，其性质通过SEM、激光粒度分析仪、屯电位仪等进行 表征。目前已经得