SiRNAp63基因表达对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响.pdfVIP

2012;32(2) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·207 · 基础研究 SiRNA 抑制p63 基因表达对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响 1 2 1 1 1 刘 展 ，张明亮 ，李毅妮 ，张 渝 ，佘周军 1 2 湖南师范大学第一附属医院消化科，湖南 长沙 410005 ；南华大学附属第二医院消化科，湖南 衡阳 421001 摘要：目的 构建SiRNA靶向p63 载体，稳定导入胆管癌细胞QBC939 后，观察细胞增殖和侵袭情况的改变。方法 荧光定量 PCR 检测胆管癌细胞株QBC939 细胞中p63 表达。构建针对p63 的shRNA慢病毒载体，转染胆管癌QBC939 细胞中，建立稳定 表达shRNA-p63 胆管癌细胞株。Western blot 检测干扰效率。噻唑蓝（MTT）和软琼脂集落形成实验检测细胞增殖的变化； Boyden 小室检测细胞侵袭情况的改变。结果 p63基因显示在QBC939 细胞中高表达。序列分析表明，重组到慢病毒载体中的 shRNA序列正确。我们利用Western blot 筛选了一个干扰p63 表达效率为66.8%的单克隆细胞。p63 表达降低不但能抑制细胞 增殖体外能力，而且还能降低细胞侵袭能力。结论 p63在胆管癌QBC939 细胞中高表达。SiRNA靶向抑制p63表达后，能明显 降低细胞增殖和侵袭能力。 关键词：p63 ；胆管癌；SiRNA 中图分类号：R57;R735.8 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）02-0207-04 DOI: CNKI:44-1627/R1355.013 /kcms/detail/44.1627.R1355.013.html Effect of small interfering RNA targeting p63 on the proliferation and invasiveness of human cholangiocarcinoma cells in vitro 1 2 1 1 1 LIU Zhan , ZHANG Mingliang , LI Yini , ZHANG Yu , SHE Zhoujun 1Department of Gastroenterology, First Hospital Affiliated to Hunan Normal University, Changsha 410005, China; 2Department of Gastroenterology, Second Affiliated Hospital of Nanhua University, Hengyang 421001, China Abstract: Objective To construct a small interfering RNA (siRNA) vector targeting p63 and observe its effect on the proliferation and invasiveness of human cholangiocarcinoma cells in vitro. Methods Real-time PCR was used to examine the expression of p63 in human cholangiocarcinoma QBC939 cells. The recombinant lentivirus shRNA-p63 vector was constructed and transfected into QBC939 cells via Lipofectamine 2000 to establish a cholangiocarcinoma cell line with stable expression o