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蛇毒中的解离素抗肿瘤转移的研究 05生技3班 吴昊毒蛇的头部两侧口角的上方，具有1对毒腺。由毒腺分泌的毒液，称为蛇毒 蛇毒组分: 蛇毒为粘稠、透明或淡黄色的液体，是多种毒蛋白、酶和多肽的混合物，含水量约为65～80％左右，有特殊腥味，易起泡沫，加热可以破坏，常温下易变腐而失活 . 蛇毒的应用 抗蛇毒血清的制备 医药上的应用 蛇毒抗肿瘤的研究 第一阶段: 1964年以前的粗毒阶段 第二阶段:分离毒素阶段(1965年至今) 蛇毒抗癌组分的分类 抑制肿瘤组织内的血管增生及肿瘤细胞之间的黏附,称为解离素(contortrostatin) 直接作用与细胞膜,有溶胞作用,称为细胞毒素 诱导细胞凋亡的组分 酶及蛇毒因子 解离素(contortrostatin) 从蛇毒中提取的一类同源性很高的多肽,含有精-甘-天冬氨酸(RGD)序列或赖-甘-天冬氨酸(KGD)序列,细胞周围的基质蛋白也含有RGD序列.细胞表面有一种称为整合素的受体,可以识别基质蛋白中的RGD序列并与之结合,解离素可以竞争抑制这一过程,使肿瘤细胞的高黏附性遭到破坏,而这种特性直接与其高转移性有关,所以解离素可以防治肿瘤细胞的转移. 解离素的分类 短链解离素：49～51个氨基酸，4对二硫键 中链解离素：约7O个氨基酸，6对二硫键．大多数解离素属于此类 长链解离素：约84个氨基酸，7对二硫键 双链解离素：分同双链(homodimeric)和异双链(heterodimeric)两类．分子量13～ 1 5KD ，每条链约含67／f、氮基酸和10个半胱氨酸(Cys)，组成4对链内二硫键和2对链间二硫键 蛇毒解离素的结构 X 射线晶体衍射 和NMR(nuclear magnetic resonance)。 均提示单链解离素呈无规则的二级结构，其二硫键和氢键将一些无规则的转角和环稳定成刚性的核心．RGD基序两侧相邻两个Cys间的13个氨基酸形成由两股反平行p折叠组成的柔性发夹环．RGD基序位于发夹环的顶端，距蛋白核心14～1 7 ；解离素的三级结构呈棒状，RGD发夹环与C端区域位于“捧”的同一端．N 端区域位于另一端。Obtustatin是目前已知最短的单链解离素(由41个氨基酸组成，发夹环含11个氨基酸)．其顶端的KTS基序代替RGD／KGD基序，可明显抑制整合素a 0 与Ⅳ型胶原的粘附 解离素的结构 解离素对肿瘤转移的影响 肿瘤侵袭和转移包括一系列内在联系的步骤 (1)癌细胞从原发瘤块脱落．穿过基底膜继续运动，与结缔组织接触; (2)与此同时，肿瘤组织建立自身的血管网．而新生的毛细血管存在缺陷如上皮细胞间的缝隙、基底膜不连续甚或缺失，便于肿瘤细胞穿越基底膜屏障进入血液循环； (3)进入循环系统后，肿瘤细胞自身形成同聚物或与白细胞、血小板粘连成异聚物．这些聚合物即瘤栓于远端血流缓慢的毛细血管网处停驻，并粘附微血管内皮细胞．诱导内皮细胞崩解; (4)癌细胞穿出微血管，与基底膜接触，通过特殊膜受体结合基质蛋白．如癌细胞表面的某些整合素与基质中的LM 结合，降解细胞外基质，完成在远端组织中的转移； (5)转移癌灶进一步诱生新生血管，满足其过度生长的需要，并在一定情况下再度发生转移 　抑制血小板聚集 肿瘤细胞介导血小板聚集(Tumor cell—induced plateletaggregation，TCIPA)是肿瘤转移的一个必需步骤 肿瘤细胞可激活血小板，增强其粘着性，使血小板易聚集于肿瘤细胞停驻处，粘附血小板的肿瘤细胞或肿瘤细胞自身可释放诱导剂(如二磷酸腺苷、组织蛋白酶B、凝血酶样蛋白酶、胶原、组织因子型凝血酶)，进一步活化、聚集血小板．形成大量血小板微血栓．便于瘤栓形成，这不仅为肿瘤细胞着床提供有利条件，也有助于肿瘤细胞躲避机体免疫系统的识别 主要机理 解离素主要是与血小板上的整合素αⅡbβ3 (又称纤维蛋白原受体)结合后,阻断血小板和纤维蛋白的结合而抑制血小板聚集 (整合素整合素为黏附分子中由α亚单位和B亚单位以非共价键连接成异二聚体的一类跨膜糖蛋白, 由胞外区、跨膜区与长短不一的含C2末端的胞内区构成。在已确认的20 余种整合素中, 根据结构的差异和结合底物的不同, 可分为17 种A亚单位如α1、α2、αv 和8种B亚单位如β1、β3、β5 等。) 从Trimeresurus gramineus蛇毒提取的解离素Trigramin与从Cattoselasma rhodostoma 蛇毒纯化的解离素Rhodostomin均能抑制TCIPA 的发生，它们抑制TCIPA 的活性是RGD合成肽的6000~18000倍 Trigramin通过拮抗血小板聚集物与乳腺癌细 胞的相互作用而抑制血小板聚集 Rhodostomin通过拮抗GPⅡb／Ⅲa