利用mRNA差别显示技术分析枸杞体细胞胚发生早期基因的差别表达DifferentialExpressionoftheG.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)20(5):16一191998 利用mRNA差别显示技术分析拘祀体 细胞胚发生早期基因的差别表达① 崔凯荣② 邢更生 秦 琳 王亚馥③ 兰（州大学干旱农业生态国家重点实验室 兰州 730000) 摘 要 本研究选用构祀体细胞胚发生体系中的继代愈伤组织 （对照）、胚性愈伤组织和早期胚体为实验 材料，提取细胞总 RNA，在 12种锚定真核生物 mRNA3末端的 OligodTl2VN 中，随机选用 OligodT12GA为引物合成了以上三种材料的cDNA第一链，以此cDNA为模板，用随机引物进行 PCR扩增，选择差别表达的片段。我们选用了OPA,OPH,OPK和OPB四组的60个随机引物对所得 的cDNA进行了PCR扩增，得到了三个在体细胞胚发生早期组织中基因特异表达的片段。结果表明， 在体细胞胚发生早期有胚胎发生特异性基因的表达，而且这种特异表达的基因在继代愈伤组织中没有表 达，说明植物的体细胞胚发生过程就是细胞内基因差别表达的结果。 关键词 mRNA，基因差别表达，PCR，体细胞胚发生，构祀 中图分类号：Q37 DifferentialExpressionoftheGeneinEarlySomaticEmbryogenesis of匆ciumbarbarurn L.bymodifiedmRNADifferentialDisplay CUIKairong XINGGengsheng QINLin WANGYafu (TheStateKeyLaboratoryofAridAgroecologyofLanzhouUniversity.Lanzhou730000) Abstract Embryogeniccalliandearlyembryocanbeobtainedfrombothauxinandauxin-freemedium. Theanalysisofdifferentialgeneexpressioninearlysomaticembryogenesishasbeenhinderedby above-mentionedmaterial.ThemodificationsoftherecentlydescribedmRNAdifferentialdisplaymeth- odwerereportedanddifferentialgeneexpressioninearlysomaticembryogenesiswasanalyzed.Wehave obtainedthreedifferentialbandsofcDNAinearlysomaticembryogenesis.Theresultsindicatethatgene expressionhastemperalandspalilorderinearlysomaticembryogenesisofLyciumbarbarurnL.Plant somaticembryogenesisistheresultsofdifferentialgeneexpressionincell. Keywords:mRNA,differentialgeneexpression,PCR,somaticembryogenesis,LyciumbarbarurnL. 植物体细胞胚的发生与发育的关键时期是胚性细胞的起始分化、它不仅决定了以后的发育途径，而且决定了 体细胞胚发生的频率 尽管体细胞分化为胚性细胞是受细胞内外各种因子所调控 （2‘〕，但最重要的因子是受特 定的基因所控制，是相应基因产物作为胚性细胞形成的分子基础。 mRNA差别显示技术是哈佛医学院的PengLiangCS〕和Strauss’〔〕于1992年发展的一种用于分离和克隆 哺乳动物正常与异常细胞之间差异表达基因的PCR方法。近年来许多学者对这一技术进行了改进，Sokolov等 ①国家自然科学基金 3（9770375)和甘肃省自然科学基金的项 目；本工作在兰州大学完成。 ②目前在中国科学院兰州沙漠研究所做博士后研究工作，兰州 7300000 ③通讯联系人 5期 崔凯荣等：利用mRNA差别显示技术分析拘祀体细胞胚发生早期基因的差别表达