反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ触发的Ｃａ２＋ 运动的影响.DOCVIP

临床医学论文-反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ触发的Ｃａ２＋ 运动的影响 【摘要】? 研究反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ （ＴＧ）触发的Ｃａ２＋ 运动的影响。【方法】 在ＰＣ１２ 细胞中转染反义ＣｌＣ-３寡核苷酸，利用生物荧光影像分析系统测定胞浆Ｃａ２＋ 技术探讨ＣｌＣ-３寡核苷酸对ＴＧ触发的Ｃａ２＋ 运动的影响。【结果】 与对照组相比，反义寡核苷酸转染对ＴＧ触发的ＰＣ１２细胞静息［Ｃａ２＋］ｉ的Ｒａｔｉｏ值和Ｃａ２＋ 释放量的Ｒａｔｉｏ值无显著影响（Ｐ＞０．０５）。但使Ｃａ２＋ 内流量明显升高（Ｐ＜０．０５）。Ｃａ２＋ 池操纵性Ｃａ２＋ 通道（ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ， ＳＯＣＣ）阻断剂ＳＫ＆Ｆ９６３６５可以浓度依赖的抑制ＴＧ触发的ＰＣ１２细胞Ｃａ２＋ 内流，但与随义、正义寡核苷酸转染组相比， ＳＫ＆Ｆ９６３６５对反义转染组细胞Ｃａ２＋ 内流的抑制作用明显增强（Ｐ＜０．０５）。【结论】 ＣｌＣ-３蛋白参与ＴＧ触发的Ｃａ２＋ 池操纵的Ｃａ２＋ 内流（ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｅｎｔｒｙ，ＳＯＣＥ），但对细胞静息钙水平及钙释放过程没有影响。 【关键词】? 反义ＣｌＣ-３寡核苷酸 钙离子； Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ 氯通道 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＣｌＣ-３ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｃａ２＋ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ （ＴＧ） ｉｎ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣｌＣ-３ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】 Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｆｒｅｅ ｃａｌｃｉｕｍ （［Ｃａ２＋］ｉ ） ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｖａｌｕｅ （Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ３４０ ／ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ３８０） ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｗｉｔｈ Ｆｕｒａ-２／ＡＭ ｐｒｏｂｅ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｏ ＣｌＣ-３ ｃａｕｓｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ＴＧ-ｉｎｄｕｃｅｄ Ｃａ２＋ ｉｎｆｌｕｘ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ， ｍｉｓｓｅｎｓｅ ｏｒ ｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ， ｗｈｅｒｅａｓ ｔｈｅ ［Ｃａ２＋］ｉ ａｔ ｒｅｓｔｉｎｇ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ａｔ ｐｅａｋ ｌｅｖｅｌ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｍｏｎｇ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＞０．０５）． ＳＫ＆Ｆ９６３６５， ａ ｂｌｏｃｋｅｒ ｆｏｒ ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ （ＳＯＣＣ）， ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ Ｃａ２＋ ｉｎｆｌｕｘ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ １．０ ?滋ｍｏｌ／Ｌ ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ ｉｎ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ-ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＳＫ＆Ｆ９６３６５ ｏｎ Ｃａ２＋ ｉｎｆｌｕｘ ｗａｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ， ｓｅｎｓｅ ｏｒ ｍｉｓｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｏｔｉｄｅ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】 ＣｌＣ-３ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｗａｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ＴＧ-ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｅｎｔｒｙ（ＳＯＣＥ）， ｂｕｔ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ［Ｃａ２＋］ｉ ａｔ ｒｅｓｔｉｎｇ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ Ｃａ２＋ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｃａ２＋ ｓｔｏｒｅｓ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＣｌＣ-３ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ； Ｃａ２＋； Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ； ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｃｈａｎｎｅｌ 　　作为胞内重要的第二信使，Ｃａ２＋ 及其介导的Ｃａ２＋ 信号在体内参与细胞分泌、分化、增殖、收缩、凋亡等多种生理过程的调节。多种信号刺激可以引发胞内Ｃａ２＋ 水平的改变。胞内Ｃａ２＋ 池的Ｃａ２＋ 释