受体型酪氨酸激酶RONΔ160对NIH-3T3细胞生长和移动浸润能力的作用.DOCVIP

临床医学论文-受体型酪氨酸激酶RONΔ160对NIH-3T3细胞生长和移动浸润能力的作用 【摘要】? 目的研究受体型酪氨酸激酶RONΔ160对3T3细胞生长和移动浸润能力的作用。方法 NIH-3T3细胞转染质粒pDR2-RONΔ160，建立稳定表达RONΔ160的3T3-RONΔ160细胞株;免疫沉淀法检测细 胞RONΔ160的酪氨酸磷酸化;倒置显微镜观察细胞形态变化;软琼脂培养法观察RONΔ160对NIH-3T3细胞生长能力的作用;体外跨室趋化运动实验检测RONΔ160对NIH-3T3细胞移动浸润能力的作用。结果成功建立3T3-RONΔ160细胞株，western blot证明其稳定表达RONΔ160蛋白;免疫沉淀试验结果显示RONΔ160 具有自身酪氨酸磷酸化;软琼脂生长实验示转染组细胞生长克隆数为146.00±3.61，而未转染组和载体对照组分别为11.67±1.15和12.67±2.52，转染组与未转染组、载体对照组分别比较，差异均有统计学意义（t分别=51.60、151.19，P均0.05）;体外跨室趋化运动实验结果示转染组穿膜细胞数为458.50±4.95，而未转染组和载体对照组分别为20.00±5.66和21.50±4.95，转染组与未转染组、载体对照组分别比较，差异均有统计学意义（t分别=58.47、437.00，P均0.05）。结论表达受体型酪氨酸激酶RONΔ160可使NIH-3T3细胞形态明显变化，并显著增强NIH-3T3细胞的生长能力和移动浸润能力。 【关键词】? 蛋白质体酪氨酸激酶 细胞生长 肿瘤浸润 ??? 【Abstract】 Objective To investigate the roles of RONΔ160receptor tyrosine kinase in growth and motile/invasive ability ofNIH-3T3cell line.Methods NIH-3T3cell was transfectedwith plasmid pDR2-RONΔ160to construct a3T3-RONΔ160cell line stably expressing RONΔ160protein;the cell morphology change was observed with convert mi-croscopy;thetyrosine phosphorylation of RONΔ160was measured by immunoprecipitationmethod;cell growth and motile/invasive ability were tested by soft agar and migration assay.Results 3T3-RONΔ160cell line stably expressing RONΔ160proteinwas obtained successfully;transfected cells were smaller spindle-shaped compared with untransfected cells and vector control cells;soft agar results showed growth cell clones ofNIH-3T3，3T3-RONΔ160and3T3-pDR2were146.00±3.61，11.67±1.15and12.67±2.52（t=51.60，151.19，P0.05）;transwell migration assayresults showedmigrated cells ofNIH-3T3，3T3-RONΔ160and3T3-pDR2were458.50±4.95，20.00±5.66and21.50±4.95（t=58.47，437.00，P0.05）.Conclusions Expression of RONΔ160led to the morphology change and the in-censement ofgrowth and motile/invasive abilities ofNIH-3T3cells. ??? 【Key words】protein-tyrosine kinase;cell growth;neoplasm invasiveness ??? 受体型酪氨酸激酶（recepteurdorigine nantais，RON）属于MET原癌基因家族成员，被广泛认为在调节肿瘤细胞的运动和浸润能力中起重要作用。RON蛋白是属于Ⅰ型跨膜蛋白的大小为180kD的异源二聚体，由40kD的胞外区和含酪氨酸激酶活性的150