原位产生共反应试剂及纳米材料构建高灵敏电化学发光免疫传感器研究.pdf

两南人学硕十学何论文 摘要 原位产生共反应试剂及纳米材料构建的高灵 敏电化学发光免疫传感器的研究 无机化学专业硕士研究生 牛欢 指导教师柴雅琴教授 摘 要 电致化学发光免疫传感器是将免疫传感器与电致化学发光(ECL)技术结合而发展起来 的具有高选择性、高灵敏度、低背景等优点的生物传感器。为达到临床诊断治疗对痕量蛋白 质定量测定的要求，免疫分析信号增强技术一直都是免疫分析领域研究的一个重要方向，在 电极表面原位产生发光试剂的共反应试剂为免疫分析的研究与发展提供了新的思路。因此， 将酶反应引入ECL反应中原位产生共反应试剂结合纳米材料特有的优点对发展高灵敏的免 疫传感器起到重要的理论意义和实际的应用价值。 本论文主要从以下几个方面开展研究工作： 1．基于L半胱氨酸膜增强过硫酸根的电致化学发光构建电致化学发光免疫传感器 该工作首次将过硫酸根／溶解氧这一发光体系用于免疫分析。首先，L-半胱氨酸 (L．Cys)沉积于金电极的表面，促进电子传递，从而增强过硫酸根发光体系的光信号。 然后，纳米金通过L．Cys表面的氨基吸附于电极表面，增强了电极表面对抗体的吸附能力， 同时促进电子传递，进一步放大ECL信号。接着，纳米金与抗体的氨基形成共价键，将 抗体修饰于电极表面。最后，牛血清白蛋白(BSA)用于封闭非特异性位点，防止非特异 性吸附。该ECL免疫传感器利用L．Cys和纳米金共同放大免疫反应信号，提高了免疫传 感器的灵敏度。在最优的实验条件下检测甲胎蛋白。其线性范围为0．01·100ng／mL，检测 限为3．3 p∥mL。该传感器制备简单，具有良好的选择性和重现性。 2．基于原位产生过硫酸根的共反应试剂用于构建超灵敏的电致化学发光免疫传感器 溶解氧作为过硫酸根共反应试剂存在标记困难，检测底液中浓度低的缺点。利用酶的催 化反应，在电极表面原位产生溶解氧，以解决上述缺点。首先利用硼氢化钠在功能化碳纳米 备的生物偶合物吸附于电极表面，发光试剂过硫酸根存在于检测底液中．同时检测底液中加 l 两南人学硕十学付论文 摘要 产生02。PdNPs作为催化剂，催化过硫酸根与氧气的电化学发光反应，进一步催化放大光信 号，提高检测灵敏度。在最优条件下检测甲胎蛋白，其线性范围为O．01 p咖L．100n∥mL。 同时该传感器具有较好的重现性和选择性，有望应用于临床分析诊断。 3．基于原位产生鲁米诺的共反应试剂用于构建超灵敏的电致化学发光免疫传感器 鲁米诺．H202发光体系被广泛应用于免疫分析，但H202作为鲁米诺的共反应试剂存在标 记困难和不稳定的问题。该工作将酶反应引入ECL反应中，原位产生H202，成功解决上述 异性位点。在含有适量葡萄糖的检测底液中，葡萄糖在GOD的催化作用下在电极表面原位 光体系应用于免疫分析存在的问题。同时采用层层自组装技术将鲁米诺和纳米金(AuNPs) 修饰于电极表面用于同载抗体，AuNPs催化鲁米诺的发光反应，进一步放大反应信号，检测 限高达33僭恤L。 关键词：电致化学发光 免疫传感器 原位产生共反应试剂 高灵敏 两南人学硕十学位论文 ABSTRACT onelectrochemiluminescence Study immunosensorConstructedand byenzyme nanoparticles HuanNiu Ino唱anicChemist巧MasterPostgraduate：