表达载体的构建1.pptVIP

实验十二、表达载体的构建及鉴定 基因工程中使用的表达系统类型 一、基因来源： 原核生物 真核生物 二、原核表达系统 1、原核表达系统： 遗传背景清楚，易改造，培养容易，费用 低，蛋白质表达水平高。但在原核中表达后所合 成的蛋白无自我修饰如糖基化等，或因折叠的方 式不正确或折叠效率的低下，最后产生的蛋白质 其生物活性很低。 2、真核表达系统 原核表达载体 克隆载体: 通常都带一个松复制子、一个多克隆位点和一个筛选标 记，以便被克隆和筛选的DNA序列能够大量增殖。 表达载体: 除了上述因子外，还需要有强启动子、核糖体结合位点(核糖体结合位点,又称SD序列，它是指mRNA分子中核糖体结合的序列，通常位于翻译起始密码子前面3～12个碱基，该序列与16S rRNA的互补)、转录起始信号、转录信号、翻译起始密码子(ATG)和终止密码子等一系列调控序列。 原核表达系统类型 大肠杆菌表达系统 遗传背景很清楚，基因操作的方法非常完善，很容易大规模培养产生大量的目的蛋白质。 但大肠杆菌表达的蛋白质大多不分泌到细胞体外，如要使蛋白分泌到细胞外，必需使目的基因带有信号肽。信号肽(signal peptide)又称前导