哈维氏弧菌运动相关基因功能研究.pdfVIP

哈维氏弧菌(Vibrio 摘 要 harveyi)是一种水产养殖业中非常重要的致病菌，严重威胁到水产养殖动物的健康，给海 水鱼类、虾类及其他养殖对象造成巨大经济损失。因此，有关哈维氏弧菌致病机理的研究 在国内外受到高度重视。现有研究发现哈维氏弧菌致病机理与胞外产物、溶血素等均相关， 但有关其运动性及运动在细菌感染早期的作用尚未见报道。鉴于运动在细菌致病早期的重 要作用，本研究以哈维氏弧菌为研究对象，寻找运动相关基因，试图揭示运动相关基因的 功能，初步了解运动性与致病性之间的相互联系，以期对哈维氏弧菌乃至其它弧菌致病机 制和防治研究提供一定的理论依据。 本研究将从Escherichiacoli 座突变株中筛选到3株运动缺陷型菌株。避开转座子内部酶切位点选用Xba／酶切突变株的 基因组DNA，在连接酶的作用下使基因组DNA的酶切片段环化，以这些环化的片段为模 板，根据转座子序列设计引物进行反向PCR，将反向PCR产物克隆到T载体测序，获得 转座子侧翼未知基因的部分序列，根据获得的序列在基因库中寻找同源基因，结果发现这 465bp的侧翼序列表现出与哈维氏弧菌ATCC 序列具有很高的同源性(96．9％)，该序列在哈维氏弧菌ATCCBAA．1儿6菌株中为一个朱 2210633菌株 过同源性比较发现与哈维氏弧菌ATCC 有第二高的同源性(92．4％)。 最后鉴定了突变株在生长、趋化、早期黏附及生物膜形成等方面的生物学特性。结果 发现，突变株Hl生长参数明显不同于野生株。趋化性测定显示，3株突变株均都趋化性减 弱。对野生型和3株突变型菌株早期粘附研究发现，野生型菌株粘附能力均强于3株突变 株。对于生物膜形成研究说明野生型菌株形成生物膜的能力强于突变株，而在3株突变株 中H2型菌株形成的生物膜的能力最弱。 总之，通过本研究寻找到哈维氏弧菌2个运动相关基因的部分序列，对这两段序列进 行同源性分析及基因功能研究，结果认为这两个片段的基因功能为运动相关基因。它们的 功能分别与pgk(磷酸甘油酸激酶)基因和鞭毛蛋白基因flaB相类似。 关键词：弧菌病，哈维氏弧菌，转座子，mini．Tnl0，运动 I ofmotile-relatedinVibrio Functions genes harveyi Abstract akind ontheearth．Vibrioisavital Vibriosisis ofbacteriosis widelyspreading harveyi andother in is harmfultowildfish、custacea、shellfish pathogen severely aquaculture，which animalsof mechanism was much aquaculture．Therefore，thepathogenic of职harveyipaid attentioninrecent researchshowedthatthe mechanismof present pathogenic years．The K wasrelatedto andSO therehasbeen